現(xiàn)貨供應:CHOdhfr細胞,二氫*缺陷型中國倉鼠卵巢細胞 說明書\價格,詳細信息:
【細胞生長】:貼壁生長或懸浮生長
【細胞形態(tài)】:上皮樣、多形態(tài)細胞樣等形態(tài)
【規(guī)格】:5×1000000cells/瓶
【包裝】:內(nèi)層無菌自封袋、防壓泡沫盒、外層防壓保溫氣泡袋、說明書。
【價格】:電詢/詢價。(或)
【細胞傳代】:1:3 傳代
【細胞活力】:90%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【細胞檢測】:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
【細胞凍存】:液氮凍存(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
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CHOdhfr細胞,二氫*缺陷型中國倉鼠卵巢細胞 說明書\價格的培養(yǎng)
【初代培養(yǎng)原理】
將動物機體的各種組織從機體中取出,經(jīng)各種酶(常用*)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理,分散成單細胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞得以生存、生長和繁殖,這一過程稱原代培養(yǎng)。
儀器:培養(yǎng)箱(調(diào)整至37℃),培養(yǎng)瓶、*瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、科研、血球計數(shù)板、離心機、水浴箱(37℃)
材料:動物組織塊
試劑:1640培養(yǎng)基(含20%小牛血清),0.25%*,Hank′s液,碘酒
【初代消化培養(yǎng)法】
(1)準備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
(2)布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
(3)處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青*的混合液中30~60分鐘。
(4)剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的*液,然后一并倒入三角燒瓶中,結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。
(5)消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
(6)分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000轉(zhuǎn)/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
(7)計數(shù):用計數(shù)板計數(shù),如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO23調(diào)整。
(8)培養(yǎng):置于36.5℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
【初代組織塊培養(yǎng)法】
《1》剪切:把組織小塊置于小燒杯或*小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸靜Hanks液,用眼科剪反復剪切1mm3塊為止。
《2》擺布:用彎頭吸管吸取若干小塊,置于培養(yǎng)瓶中,用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底部,小塊相互距離以0.5cm為宜,每一25ml培養(yǎng)瓶底可擺布20~30塊。
《3》輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,另瓶底向上,注意翻瓶時勿另組織小塊流動,塞好瓶塞,置36.5℃溫箱培養(yǎng)2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸。
《培養(yǎng)》從微箱中取出培養(yǎng)瓶,開塞,46度斜持培養(yǎng)瓶,箱瓶底腳部輕輕注入培養(yǎng)液少許,然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過來,讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養(yǎng)。待細胞從組織塊游出數(shù)量增多后。再補加培養(yǎng)液。
【傳代培養(yǎng)法原理】
細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。 傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
【材料和試劑】
1)細胞:貼壁細胞株
2)試劑:0.25%*、1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清)
3)儀器和器材:倒置顯微鏡,培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
【操作步驟】
1)吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2)向瓶內(nèi)加入*和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。
3)置溫箱中2~5分鐘,當發(fā)現(xiàn)細胞質(zhì)回縮,細胞間隙增大后,立即終止消化。
4)吸除消化液,向瓶內(nèi)注入Hanks液數(shù)毫升,輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶,把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時,動作要輕,以免把已松動的細胞沖掉流失,如用*液單獨消化,吸除*液后,可不用Hanks液沖洗,直接加入培養(yǎng)液。
5)用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。
6)計數(shù)板計數(shù)后,把細胞懸液分成等份分裝入數(shù)個培養(yǎng)瓶中,置溫箱中培養(yǎng)。