呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）說明書

【產(chǎn)品】  

用途

用于定性檢測有癥狀病人鼻沖洗液或鼻咽拭子標(biāo)本中的呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白抗原的免疫層析試驗(yàn)。該試驗(yàn)旨在用于新生兒或5歲以下兒童呼吸道合胞病毒感染的體外診斷。建議陰性結(jié)果做細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)一步證實(shí)。

摘要和解釋

RSV是上呼吸道和下呼吸道感染的常見原因，也是嬰幼兒患細(xì)支氣管炎和肺炎的主要原因。RSV在每年的秋天、冬天和春天有規(guī)律的發(fā)生，出現(xiàn)感染和暴發(fā)。雖然RSV在較大兒童和成人可引起顯著的呼吸道疾病，但比嬰幼兒緩和的多。為了獲得有效的抗菌治療，RSV的快速鑒定診斷就顯得特別重要?？焖勹b定可以減少住院時(shí)間，減少抗菌素的使用，減少住院治療費(fèi)¹。

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）提供了一種簡便快速檢測鼻洗液和鼻咽拭子標(biāo)本中的 RSV的方法。由于它的簡便快速性，有助于做出治療和住院的決定。

測試原理

     呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種用鼻洗液和鼻咽拭子標(biāo)本檢測RSV融合蛋白抗原的免疫層析膜試驗(yàn)。抗RSV抗體，樣本線，吸附到硝酸纖維素膜上，對照抗體作為第二條線吸附到同一膜上?？?/span>RSV和對照抗體結(jié)合到可視粒子上，這種粒子干燥結(jié)合到惰性纖維支持物上。形成的結(jié)合物墊和有條紋的膜結(jié)合形成檢測條。檢測條置于一個(gè)硬紙盒的右邊，這個(gè)硬紙盒是一個(gè)書形的絞鏈的檢測裝置。拭子標(biāo)本（對照和病人的）需要一個(gè)預(yù)備步驟，鼻洗液標(biāo)本不需要預(yù)備。執(zhí)行試驗(yàn)時(shí)，測試樣本加到檢測條的頂部的白墊上，閉合檢測裝置。標(biāo)本中的存在的RSV抗原與抗RSV抗體結(jié)合物結(jié)合，形成的抗原結(jié)合物復(fù)合物被固定的抗RSV抗體捕獲，形成樣本線。固定的對照線抗體捕獲一個(gè)可視的結(jié)合物，形成一條粉紅色的對照線。對照線在未檢測的裝置中是藍(lán)色的。試驗(yàn)結(jié)果用可視的檢測的粉紅色到紫色線的存在與否來解釋。陽性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)一條樣本線和一條對照線。陰性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時(shí)，只出現(xiàn)一條對照線，表明樣本中未檢測到RSV抗原。對照線未出現(xiàn)，或仍為藍(lán)色，表示無論樣本線出現(xiàn)與否，測試無效。

試劑和材料

提供的材料

檢測卡：包被有鼠抗RSV抗原特異抗體和對照線抗體的膜與鼠抗RSV抗體結(jié)合物和對照線抗體結(jié)合物結(jié)合在一個(gè)折合式檢測卡上。未檢測的膜在對照線區(qū)域有一條藍(lán)色線。

移液管：固定體積（100μl）的移液管用于將樣本轉(zhuǎn)移到檢測裝置中。只能用廠家提供或能轉(zhuǎn)移100μl樣本體積的校正管。

陽性對照拭子：滅活的RSV干燥結(jié)合到拭子上。

陰性對照拭子；滅活的A群鏈球菌干燥結(jié)合到拭子上。

對照拭子用的瓶裝洗脫液：盛有一定體積（0.5ml）洗脫液，用于洗脫對照拭子。不要使用其他洗脫液。

未提供的材料

時(shí)鐘、秒表或跑表；鼻洗液收集容器，鼻咽拭子，運(yùn)輸媒介。

可選物品

鼻咽（NP）拭子標(biāo)本附件包：

鼻咽拭子：用于呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）的無菌泡沫拭子。

用于拭子標(biāo)本的洗脫液小瓶：

瓶中盛有一定體積的洗脫液（0.5 ml），用于處理要測試的拭子標(biāo)本。

注意事項(xiàng)

1．  體外診斷用。

2．  使用前要將檢測裝置密封在錫箔中。

3．  不要使用過期的試劑盒。

4．  不要將不同批號試劑盒的試劑混合使用。

5．  檢測條頂部的白色樣本墊盛有從病毒中提取靶抗原的試劑，為了保證*操作，加樣時(shí)將標(biāo)本慢慢加到墊的中央，以使所有樣本都吸附到墊上。

6．  RSV陽性對照拭子是用滅活的RSV感染組織培養(yǎng)細(xì)胞準(zhǔn)備的，隨后用生物測定程序進(jìn)行了測試。測定時(shí)要遵守一切注意事項(xiàng)。樣本可能有感染性，應(yīng)當(dāng)根據(jù)地方、州和聯(lián)邦的法規(guī)建立處理和處置措施。

7．  檢測中加入的試劑不足時(shí)會(huì)出現(xiàn)無效結(jié)果。為確保加入足夠量的體積，在將吸管中的內(nèi)容物加到樣本墊上時(shí)，要確定移液管的下部是充盈的、沒有氣泡產(chǎn)生。如果有空氣存在，通過擠壓上部的吸球，將標(biāo)本排回到容器中，重新吸入標(biāo)本。必要時(shí)，換一個(gè)新吸管。

8．  測試鼻洗液標(biāo)本時(shí)，吸樣本時(shí)要避開粘液部分。如果吸管堵塞，致使下部柄部不充盈，通過擠壓上部的吸球把標(biāo)本排回到容器中，重吸樣本，必要時(shí)換一個(gè)新吸管。

9．  聚酯、人造纖維、泡沫和棉花鼻咽拭子都有易彎曲的柄，評估發(fā)現(xiàn)這些都可用于呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）。不要用藻酸鈣鼻咽拭子。

10．  所有移液管和洗脫瓶都是單次使用的，不要用于多個(gè)樣本。

貯存和穩(wěn)定性

試劑盒在室溫（59-86℉，15-30℃）保存，呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）在失效期前是穩(wěn)定的。失效期標(biāo)注在外包裝和盒內(nèi)。

標(biāo)本采集和處理

為了取得*結(jié)果，請使用新鮮鼻咽拭子或鼻洗液標(biāo)本。

鼻咽拭子：

聚酯、人造纖維、泡沫和棉花鼻咽拭子都有易彎曲的柄，評估發(fā)現(xiàn)這些都可用于本試劑盒。將收集后的拭子標(biāo)本在1小時(shí)內(nèi)加入到0.5~3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。如果不能立即測定，洗脫液拭子標(biāo)本可在室溫保存4小時(shí)，或2-8℃保存48小時(shí)。測試前將標(biāo)本平衡至室溫，并輕輕旋動(dòng)。

鼻洗液：

用與病人年齡相稱的操作，在標(biāo)準(zhǔn)采樣杯中收集洗液標(biāo)本。如果不能立即測定，洗液可在室溫保存4小時(shí)，或2-8℃保存48小時(shí)。測試前將標(biāo)本平衡至室溫，并輕輕旋動(dòng)。洗液標(biāo)本可在測試前加入到3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。轉(zhuǎn)移介質(zhì)可導(dǎo)致洗液稀釋，這種稀釋可能像操作部分報(bào)道的那樣降低試驗(yàn)敏感性。

轉(zhuǎn)移介質(zhì)：

下列轉(zhuǎn)移介質(zhì)受過測試，適用于本試劑盒。

Amies介質(zhì)

Binax洗脫液

Hank^,s鹽平衡液

M4介質(zhì)

M4RT介質(zhì)

M5介質(zhì)

鹽水

Stuart^,s介質(zhì)

質(zhì)量控制

日常質(zhì)量控制：

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）內(nèi)嵌有操作對照。作為日常質(zhì)量控制，健侖生物技術(shù)人員建議每次試驗(yàn)都要記錄這些對照結(jié)果。

操作對照

A．未檢測裝置在對照位置有一根藍(lán)色線。如果進(jìn)行試驗(yàn)試劑起作用了，檢測裝置中的這根藍(lán)色線將變?yōu)榉奂t色。

B． 結(jié)果窗口中清晰的背景顏色是陰性背景對照，15分鐘內(nèi)窗口背景顏色會(huì)從粉紅色到白色。背景顏色不應(yīng)干擾測試。

外部陰陽性對照：

建議用陰陽性對照確保：

l  所用試劑有效

l  試驗(yàn)操作正確

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）內(nèi)裝有陰陽性對照拭子。這些拭子將監(jiān)控試劑故障。陽性對照確保測定準(zhǔn)確。每打開一個(gè)新試劑盒都要測試這些拭子，其他對照遵照下列要求做：

l  地方、州和/或聯(lián)邦法規(guī)

l  遵照集團(tuán)和/或本試驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制程序

為了正確指導(dǎo)質(zhì)量控制操作，請參閱NCCLS EP12A和42CFR493.1202（C）（僅限美國用戶）。

如果未得到正確的質(zhì)控結(jié)果，請不要報(bào)告病人結(jié)果，在工作時(shí)間健侖生物技術(shù)部（EST）。

樣本準(zhǔn)備步驟

鼻洗液：

鼻洗液樣本不需要預(yù)備，直接進(jìn)入測定程序。

鼻咽拭子：

在0.5-3.0ml的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中轉(zhuǎn)動(dòng)洗脫拭子，進(jìn)入測試程序。注意：如果在洗脫液中洗脫拭子，按照下列程序預(yù)備對照拭子。

對照拭子：

1．  試劑盒內(nèi)盛有裝滿洗脫液的小瓶，將瓶蓋開啟。

2．  將欲測試拭子放入瓶中，將拭子在液體中轉(zhuǎn)動(dòng)3圈。

3．  將拭子按在瓶壁上轉(zhuǎn)動(dòng)，使樣本從拭子中移出。

4．  扔掉拭子。

5．  盡早檢測液體樣本，進(jìn)入檢測程序。

測試程序

1．  測試前將裝置從錫箔中取出平放在工作臺上。

2．  將移液頭插入液體樣本中，擠壓上部吸球吸液。當(dāng)吸液頭部注滿液體后松開吸球，這將會(huì)把液體吸入移液管中。移液管下部不要產(chǎn)生空氣。

3．  看檢測裝置上的箭頭找到白色樣本墊，通過擠壓上部吸球，慢慢將移液管中液體全部（100μl）加入到樣本墊的中部。

4．  立即從檢測裝置中揭去粘附襯，合上并密封裝置，15分鐘時(shí)讀窗口中的結(jié)果。早于或晚于15分鐘結(jié)果可能不準(zhǔn)確。

注意：讀結(jié)果時(shí)，如有必要，將裝置傾斜以減少眩光。

結(jié)果解釋

對陰性標(biāo)本，窗口底部的藍(lán)色對照線變紫紅色，無其他線出現(xiàn)。

對陽性標(biāo)本，藍(lán)色對照線變紫紅色，上部的樣本線也變紫紅色。

如果對照線仍為藍(lán)色或根本沒有出現(xiàn)，試驗(yàn)結(jié)果無效。

對無效試驗(yàn)，用一新的檢測裝置重做。如果問題沒有解決，請廠家或者中國地區(qū)總代理商廣州健侖生物科技有限公司。

結(jié)果報(bào)告

建議報(bào)告結(jié)果

陽性

RSV抗原陽性?；畈《敬嬖跁r(shí)可能出現(xiàn)陽性結(jié)果。

陰性

RSV抗原陰性。由于RSV不能被排除的感染，樣本中的抗原可能在檢出限以下。健侖生物技術(shù)人員建議對陰性樣本做培養(yǎng)。

局限性

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）檢測活的和死的RSV。測試結(jié)果與標(biāo)本中的抗原量有關(guān)，可能與用同一標(biāo)本做細(xì)胞培養(yǎng)所得結(jié)果不*。

標(biāo)本采集量不足或病毒排出水平低可能出現(xiàn)差一點(diǎn)的結(jié)果，甚至可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

陰性結(jié)果不能排除RSV感染，也不能排除造成呼吸道感染的其他病毒的感染。因此，所得結(jié)果要結(jié)合臨床結(jié)果作出準(zhǔn)確診斷。測試結(jié)果在用palivizumab治療的病人中還沒進(jìn)行評估。

然而一項(xiàng)分析研究表明palivizumab干擾呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）檢測RSV的能力。

抗菌素和干擾素的干擾潛力還未確定。

單克隆抗體可能不能檢測所有抗原變異株或新株RSV。

預(yù)期值

RSV的流行年年不同，在秋、冬季暴發(fā)。RSV的陽性檢出率受許多因素影響，包括標(biāo)本采集方法，所用試驗(yàn)方法，地理位置，特定區(qū)域的流行。2002年臨床研究中，在洗液標(biāo)本中RSV的平均流行是2%，咽拭子標(biāo)本中是4%。2003年收集的鼻咽拭子標(biāo)本中RSV的流行是21%。

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參考文獻(xiàn)

1）  Williams, KM, Jackon MA, Hamiliton M. Rapid Diagnostic Testing for URIs in Children: Impact on Physician Decision Making and Cost. Infect. Med. 19（3）: 109-111, 2002.

2）  Lopez, Juan A., R. Bustos, C. Orvell, M. Berois, J. Arbiza, B. Garcia-Barreno, J.Melero. Antigenic Structure of Human Respiratory Syncytial Virus Fusion Glycoprotein. Jr. of Virology, vol. 72, no.8, August 1998, pp.6922-6928. 

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