成骨特異性轉錄因子抗體動物體內單抗的方法迄今為止，通常情況下均采用動物體內單抗的方法，鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得，因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內，在小鼠腹腔內生長雜交瘤，并產生腹水，因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高?？梢娫摲ú僮骱啽?、經濟，不過，腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白（包括Ig），因此在很多情況下要提純后才能使用，而且還有污染動物病毒的危險，故而用SPF級小鼠。成骨特異性轉錄因子抗體A、材料：a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷（Pristane）或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法：a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟，每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細胞，每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后，每天觀察小鼠腹水產生情況，如腹部明顯膨大，以手觸摸時，皮膚有緊張感，即可用16號針頭采集腹水，一般可連續(xù)采2-3次，通常每只小鼠可采5-10ml腹水；d. 將腹水離心（2000r/min 5分鐘），除去細胞成分和其他的沉淀物，收集上清，測定抗體效價，分裝，-70℃凍存?zhèn)溆?，或凍干保存?span style="color: #ff0000">（2） 體外培養(yǎng)單抗的方法總體上講，雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞（anchorage dependent cell，ADC），因此既可以進行單層細胞培養(yǎng)，又可以進行懸浮培養(yǎng)。
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Mouse Aquaporin 4,AQP-4 小鼠水通道蛋白4（AQP-4）
Mouse Aquaporin 3,AQP-3 小鼠水通道蛋白3（AQP-3）
Mouse Aquaporin 1,AQP-1 小鼠水通道蛋白1（AQP-1）
Mouse Aquaporin 0,AQP-0 小鼠水通道蛋白0（AQP-0）
Mouse Aquaporin 2,AQP-2 小鼠水通道蛋白2（AQP-2）
Mouse Thyroglobulin,TG 小鼠甲狀腺球蛋白（TG）
Mouse Inhibin,INH-A 小鼠抑制素A（INH-A）
Mouse Chorionic Gonadotrophin β,β-CG 小鼠絨毛膜*β（β-CG）
Mouse sex hormone-binding globulin,SHBG 小鼠性激素結合球蛋白（SHBG）
Mouse Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 小鼠脫氫表雄酮S7（DHEA-S7）
Mouse Dehydroepiandrosterone,DHEA 小鼠脫氫表雄酮（DHEA）
Mouse High mobility group protein B1,HMGB-1 小鼠高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）
Mouse Endothelial lipase,EL 小鼠內皮脂肪酶（EL）
雜交瘤細胞的單層細胞培養(yǎng)法是各個實驗室zui常用的手段，即將雜交瘤細胞加入培養(yǎng)瓶中，以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳，然后收集培養(yǎng)上清，其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然，這種方法制備的單抗量極為有限，無疑是不適用于單抗的大規(guī)模。要想在體外大量制備單抗，就必須進行雜交瘤細胞的大量（高密度）培養(yǎng)。單位體積內細胞數量越多，細胞存活時間越長，單抗的濃度就越高，產量就越大。
上海撫生實業(yè)有限公司
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