土壤淀粉/酶試劑盒-微量法注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
淀粉/酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉/酶主要來自于微生物， 是一種重要的酶制劑，廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。
測(cè)定原理
淀粉/酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖，可與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在 540nm 處有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。
土壤淀粉/酶試劑盒-微量法需自備的儀器和用品
天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板、甲苯。
試劑的組成和配制
試劑一：液體 12mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 8mL×1 瓶，4℃保存。若出現(xiàn)沉淀析出，需 70℃加熱溶解后再用。試劑三：液體 14mL×1 瓶，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。
土壤淀粉/酶試劑盒-微量法測(cè)定加樣表：
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
土樣（g） | 0.04 | 0.04 |
甲苯（μL） | 20 | 20 |
25℃靜置 15min | ||
試劑一（μL） | 100 | 100 |
試劑二（μL） | 120 | |
蒸餾水（μL） | 120 | |
充分混勻，37℃反應(yīng) 24h，8000rpm，25℃，離心 10min | ||
上清液（μL） | 120 | 120 |
試劑三（μL） | 120 | 120 |
充分混勻，90℃水浴 5min，待冷卻后，取 200μL 于 96 孔板中測(cè)定 540nm 處吸光值， 分別記為A 對(duì)照管和A 測(cè)定管，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 | ||
土壤淀粉/酶試劑盒-微量法計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1263x - 0.034，R2 = 0.9917；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/mL，y 為吸光值ΔA。酶活單位定義：每 g 土樣每天催化生成 1mg 還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL（mg/d/g 土樣）=（△A +0.034）÷ 0.1263×V 反總÷W÷T
=47.51×（△A +0.034）
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.24mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1d； W：樣本質(zhì)量，0.04g。
