土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒-可見分光光度法注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)
胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。
測定原理
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對二甲氨基苯甲/醛產(chǎn)生紅色化合物，在 585nm 處有
特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
自備實(shí)驗用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿，甲苯、蒸餾水。
土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒-可見分光光度法試劑組成和配制
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 50mL×1 瓶，4℃避光保存。
樣品處理
新鮮土樣風(fēng)干，過 30-50 目篩。
土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒-可見分光光度法測定操作表
對照管 | 測定管 | |
土樣（g） | 0.2 | 0.2 |
甲苯（μL） | 30 | 30 |
混勻，25℃靜置 15min | ||
蒸餾水（μL） | 200 | |
試劑一（μL） | 200 | |
混勻，37℃培養(yǎng) 24h | ||
蒸餾水（μL） | 400 | 400 |
4000rpm，4℃，離心 30min，取上清 300μL 于新的 EP 管中 | ||
試劑二（μL） | 30 | 30 |
混勻，沸水浴 5min | ||
試劑三（μL） | 900 | 900 |
混勻，37℃顯色 20min，取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中，蒸餾水調(diào)零，測定 544nm 處吸光值， 記為 A 對照管和 A 測定管，ΔA=A 測定管-A 對照管。 | ||
土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒-可見分光光度法計算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y 為吸光值 ΔA。
酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。土壤幾丁質(zhì)酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000
= 598×（ΔA +0.0007）
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.63mL；W：樣本質(zhì)量，0.2g；T：反應(yīng)時間，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL
注意事項
1． 試劑一充分混勻后再使用。
