土壤中性蛋白/酶試劑盒-可見分光光度法正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化，其 水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。
測定原理：
中性條件下，S-NPT 可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨/酸；在堿性條件下，酪氨/酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在 680nm 有特征吸收峰。
實驗中所需儀器及設(shè)備：
可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水
土壤中性蛋白/酶試劑盒-可見分光光度法試劑組成和配置：
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑 4℃保存； 試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2mL 試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入 8ml 試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑 4℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 40ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃ 保存；
試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑六：液體 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 標準酪氨/酸溶液，4℃保存； 試劑七：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。
土壤中性蛋白/酶試劑盒-可見分光光度法測定操作：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 680nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣（g） | 0.04 | 0.04 |
試劑一（μL） | 300 | |
試劑三（μL） | 300 |
混勻后，40℃水浴 30min，振蕩 5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸
試劑二（μL） | 100 | 100 |
混勻，8000g 25℃離心 10min，取上清液
測定管 | 對照管 | 標準管 | |
上清液（μL） | 150 | 150 | |
試劑六（μL） | 150 | ||
試劑四（μL） | 700 | 700 | 700 |
試劑五（μL） | 150 | 150 | 150 |
混勻，40℃水浴 20min，8000g 25℃離心 10min，取上清液 1mL，680nm 下讀取各管吸光值A(chǔ)
注意：標準管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。
土壤中性蛋白/酶試劑盒-可見分光光度法活性計算：
單位定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 酪氨/酸為一個 S-NPT 活力單位。
S-NPT(mg/d/g 土樣)=C 標準×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管×V 反總÷W÷T=24×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管
C 標準管：標準管濃度，0.05mg/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL；T：反應(yīng)時間，
30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.04g。
