土壤木質(zhì)素過氧化物酶（S-Lip）檢測試劑盒說明書，注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
木質(zhì)素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，屬于木質(zhì)素降解酶系，在木質(zhì)素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉(zhuǎn)化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應(yīng)用潛力。
測定原理：木質(zhì)素過氧化物酶氧化藜蘆醇生成藜蘆醛，在 310nm 處有特征吸收峰。
土壤木質(zhì)素過氧化物酶（S-Lip）檢測試劑盒自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）。
試劑組成和配制:
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 6mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
樣品處理:
新鮮土樣風(fēng)干，過 30-50 目篩。
測定操作：
| 對照管 | 測定管 |
土樣（g） | 0.04 | 0.04 |
甲苯（μ L） | 30 | 30 |
25℃靜置 15min | ||
試劑一（μ L） |
| 100 |
蒸餾水（μ L） | 100 |
|
試劑二（μ L） | 60 | 60 |
試劑三（μ L） | 40 | 40 |
30℃震蕩反應(yīng) 3h，冰浴 5min，10000g，4℃離心 10min，取上清 150μ L，于微量石英比色皿/96 孔板，測定 310nm 處吸光值，分別記為 A 對照和 A 測定，△A=A 測定- A 對照 | ||
土壤木質(zhì)素過氧化物酶（S-Lip）檢測試劑盒酶活計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天氧化 1nmol 藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
S-LiP 活性（nmol/d /g 土樣）=
DA
e ´ d
×V 反總÷W÷T= 172×△A÷W
ε ：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；
W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h
b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天氧化 1nmol 藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
S-LiP 活性（nmol/d /g 土樣）=
DA
e ´ d
×V 反總÷W÷T= 344×△A÷W
土壤木質(zhì)素過氧化物酶（S-Lip）檢測試劑盒ε ：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h
