人DC細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介：樹(shù)突狀細(xì)胞 ( Dendritic cells, DC) 是機(jī)體功能的專職抗原遞呈細(xì)胞 ，它能高 效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原 ，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力 ，成熟DC能有 效激活初始型T細(xì)胞 ，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
DC的來(lái)源有兩條途徑： ①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC ，稱為髓樣 DC ，也稱DCl ，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；包括朗格漢斯細(xì)胞 ， 間 皮 (或真皮) DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等 ，②來(lái)源于淋巴樣干細(xì)胞 ，稱為淋 巴樣DC或漿細(xì)胞樣DC ，即DC2 ，與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞。樹(shù)突狀 細(xì)胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子 ，是功能強(qiáng)大的 專職抗原遞呈細(xì)胞(APC)。 DC自身具有免疫刺激能力 ，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活 未致敏的初始型T細(xì)胞的APC。
培養(yǎng)基：原代樹(shù)突狀細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人DC細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1446 |
組織來(lái)源 | 外周血 | 種屬來(lái)源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長(zhǎng)特性 | 半懸浮細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性傳代 |
原代細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。
3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。
4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。
5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6.分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7.計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。
8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶蓋需擰松半圈。
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注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
