細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
中文名稱：Ire1抑制劑(STF-083010)
英文名稱：STF-083010
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
產(chǎn)品貨號：BJ-01X7215
英文名稱：STF-083010 產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg STF-083010是一種Ire1抑制劑。STF-083010抑制Ire1核酸內(nèi)切酶活性，不影響激酶活性。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ ：307543-71-1 純度：98.0% 分子量：317.38 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Radix glehniae北沙參LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Mouse Anti-human IgG(3D3) 鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 1mgS100B S100B蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Tropiladaps clareae亮熱厲螨（小蜂螨?。㎜AMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PI3 Kinase p110 delta 磷脂酰肌醇激催化亞單位D抗體 規(guī)格: 0.1mlKLK15 激肽釋放15抗體 規(guī)格: 0.2ml
Amapari virus(AMAV)阿馬帕里病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Salmonella typhimurium O 傷體蛋白O抗原抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-β catenin(Tyr142) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Virus(HFRSV)腎綜合癥出血熱病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周MTCH1 細(xì)胞增誘導(dǎo)蛋白60（早老素相關(guān)蛋白） 規(guī)格: 0.2mlPhospho-CEBP beta (Thr235) 磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體 規(guī)格: 0.1ml
Trichodysplasia Spinulosa Associated Polyomavirus(TSPyV) TS多瘤病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周TLR9/CD289 Toll樣受體9抗體 規(guī)格: 0.1mlFAAH1 脂肪酸酰胺水解1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Borrelia recurrentis回歸熱疏螺旋體（回歸熱包柔螺旋體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周LZTFL1 亮拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1抗體 規(guī)格: 0.1mlC3orf18 3號染色體開放閱讀框18抗體 規(guī)格: 0.2ml
Xiphinema cobb劍線蟲PCR試劑盒屬 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CDCREL/SEPT5 細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白1 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgM 兔抗猴IgM 規(guī)格: 1mg
Flos inulae旋覆花PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SLC33A1 乙酰輔A轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-horse IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml
Staphylococcus capitis頭狀葡萄球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體 規(guī)格: 0.2mlClassical swine fever virus, CSFV 豬瘟毒抗體 規(guī)格: 0.2ml
Aeromonas punctata斑點(diǎn)氣單胞探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PID1 磷酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlAngiotensin III 管緊張素III抗體 規(guī)格: 0.2ml
Ire1抑制劑(STF-083010)人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
麥芽浸粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：200g
人Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
犬基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠水通道蛋白2(AQP-2)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
馬(COR)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠成神經(jīng)細(xì)胞瘤RAS 病毒(v-ras)癌基因同源物免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
兔子環(huán)鳥苷(cGMP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
