操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱：caspase-3抑制劑(Z-DEVD-FMK)
英文名稱：Z-DEVD-FMK
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
產(chǎn)品貨號：BJ-01X7172
英文名稱：Z-DEVD-FMK 產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg Z-DEVD-FMK是一種特異性的caspase-3抑制劑，IC50為18μM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ ：210344-95-9 別名：Caspase-3 Inhibitor 純度：98.0% 分子量：668.66 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
White Sturgeon Iridovirus(WSIV)高首鱘虹彩病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NMDAR2B 谷受體2B抗體 規(guī)格: 0.1ml
Human Immunodeficiency Virus 2(HIV-2)人免疫缺陷病毒II型A組前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TNF alpha 瘤壞死因子-α/TNFα抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nipah Virus(NiV)尼帕病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-eNOS(Ser1177) 磷酸化氮合成3抗體（內(nèi)皮型） 規(guī)格: 0.1ml
芝麻源性成分PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PIH1D1/NOP17 核仁同源蛋白17抗體 0.2ml
Russian Spring-summer Encephalitis Virus俄羅斯春夏腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1mlHCG alpha(4A8) 人絨毛膜促性激素α 亞基單抗 規(guī)格: 0.1ml
Rice Yellow Mottle Virus(RYMV)水稻黃斑駁病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PAX6 轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根過氧化物標記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Herba taxilli桑寄生PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CACNB2 L-型電壓依賴型鈣通道β抗體 規(guī)格: 0.1mlPDCD2L/MGC13096 程序性細胞死亡2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Yersinia pseudotuberculosis假結核耶爾森LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周EPB42/protein 4.2 紅細胞膜蛋白4.2抗體 規(guī)格: 0.2mlET-1 內(nèi)皮素-1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Feline Coronavirus(FCoV )貓?zhí)结樂晒舛縍T-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SynaptotagminVI 突觸蛋白6抗體 規(guī)格: 0.1mlTBX-5 轉(zhuǎn)錄因子Tbx5抗體 0.1ml
Rhizoma paridis重樓探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Phospho-p73(Tyr99) 磷酸化P73瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1mlIRGM 免疫相關鳥苷三磷酸基因抗體 規(guī)格: 0.2ml
caspase-3抑制劑(Z-DEVD-FMK)人抗狂犬病毒(RV)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷
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酪蛋白胨 英文名稱：Peptone from Casein 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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