中文名稱:Caspase 1 活性檢測試劑盒
英文名稱:Caspase 1 Activity Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20次|100次
產(chǎn)品貨號:BJ-01X6337
本試劑盒是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中caspase 1酶活性或純化的caspase 1酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時,除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測20個樣品。 試劑盒組分: 裂解液——————8ml 檢測緩沖液——————8ml Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl pNA(10mM)——————200μl Caspase是一個在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也稱interkeukin 1b conberting enzyme(ICE),有時被寫作caspase-1或caspase 1,是caspase家族中可以剪切IL-1b前體蛋白或IL-18前體產(chǎn)生相應(yīng)成熟的細(xì)胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前體蛋白,產(chǎn)生20kD和10kD的片段,這兩個片段可以形成異源二聚體(heterodimer),并進(jìn)一步由兩個異源二聚體形成四聚體。Caspase 1可以通過剪切其凋亡Bcl-XL來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,并通過其對一些細(xì)胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)免疫反應(yīng)。 本caspase 1活性檢測試劑盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 1的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 試劑盒中提供了caspase 1催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,可以作為定量caspase 1酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。 儲存條件:-20℃。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
Madurella spp.馬杜拉分枝LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Herba commelinae鴨跖草染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周
Rhizoma sparganii三棱PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周
Aphelenchoides ritzemabosi菊花滑刃線蟲PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Peronospora farinosa甜菜霜霉病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Paranavirus(PARV)帕臘南病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
European Brown Hare Syndrome Virus(EBHSV)歐洲棕色野兔綜合癥病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Rhizoma anemarrhenae知母LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周
Alder yellows phytoplasma榿樹黃化植原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Cortex acanthopanacis五加皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周
水牛源性成分PCR檢測試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Mannheimia spp.曼氏桿通用探針法熒光定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周
Caspase 1 活性檢測試劑盒品紅亞硫酸鹽(FUCHSIN SULFITE)染色試劑盒
細(xì)胞涂片巴氏(papanicolaou;PAP)染色試劑盒 50次
細(xì)胞血紅素氧合-1(HEME OXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒 20次
細(xì)胞甘油-3-脫氫-2(Glycerol-3-Phosphate Dehydrogenase-2)活性比色法定量檢測試劑盒 20次
組織HSV1(HERPES SIMPLX1)病毒定性檢測試劑盒 20次
葡萄糖 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支
動物血小板活性線粒體分離試劑盒 10次
10%NaCl胰胨水 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支
血液二酯2(PDE2)活性熒光定量檢測試劑盒 10次
基質(zhì)膠體法人體胚胎干細(xì)胞繁殖試劑盒 10次
6.5%氯化鈉肉湯 英文名稱:6.5% NaCl Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)