一、細(xì)胞基本屬性
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號 |
大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | A01X1757 |
二、使用方法：
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
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細(xì)胞培養(yǎng)注意事項：
公司產(chǎn)品僅用于科研關(guān)于原代細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項。原代細(xì)胞培養(yǎng)是一項非常重要的實驗技術(shù)，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。
首先，無菌操作是關(guān)鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細(xì)菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。
其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細(xì)胞對培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細(xì)胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。
另外，也是細(xì)胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補(bǔ)充。
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細(xì)胞在消化分離后需要一定的時間來適應(yīng)新環(huán)境，所以在這段時間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。
此外，消化時間也要控制得當(dāng)。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重，影響細(xì)胞培養(yǎng)成活率。
最后，對于一些特殊類型的細(xì)胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進(jìn)細(xì)胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。
