羥脯氨酸（HYP）含量檢測(cè)試劑盒多種樣本，皆可操作

2020年08月18日 11:29南京信帆生物技術(shù)有限公司點(diǎn)擊量：1741

羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒多種樣本，皆可操作

羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)是亞氨基酸之一，是一種非必需氨基酸，是膠原組織的主要成分之一，且為膠原中*的氨基酸，約占膠原氨基酸總量的13%。膠原蛋白是體內(nèi)含量多的蛋白質(zhì)，約占人體蛋白質(zhì)總量1/3。利用羥脯氨酸在膠原蛋白中含量高這一特點(diǎn)，通過(guò)血液和尿液對(duì)羥脯氨酸的測(cè)定，可了解體內(nèi)膠原蛋白分解代謝情況，即可作為結(jié)締組織分解情況指標(biāo)。很多疾病可伴有膠原代謝變化而引起血、尿及組織羥脯氨酸的含量改變。目前臨床檢驗(yàn)普遍使用氨基酸自動(dòng)分析儀效果滿意，此外還有比色法、氣相色譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法等。

產(chǎn)品說(shuō)明：
HYP 是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此 HYP
含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的 HYP，進(jìn)一步被氯胺 T 氧化，氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基苯甲全反應(yīng)，產(chǎn)生
紅色化合物，在 560nm 處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣品水解液 560nm 吸光值，可計(jì)算 HYP 含量。

操作步驟：
一、羥脯氨酸提取：
1、組織：稱取約 0.2g 樣品于玻璃管，將組織盡量剪碎以便消化，蓋子稍松不密閉。加入 2mL 的提
取液，煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小時(shí)消化至沒(méi)有可見(jiàn)大的團(tuán)塊，16000rpm，25℃，離心20min（若離心后仍有雜質(zhì)，可通過(guò)過(guò)濾去除），用 10mol/L NaOH（約 1mL）調(diào)節(jié) pH 值至 6～8 范圍內(nèi)。蒸餾水定容至 4mL，取上清待測(cè)。（過(guò)程中可能有黑色物質(zhì)生成，若長(zhǎng)時(shí)間不能消化，可能為碳化的物質(zhì)）
2. 細(xì)胞：取500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小時(shí)消化至透明狀，16000rpm，25℃，離心 20min，用 10mol/L NaOH（約 0.5mL）調(diào)節(jié) pH 值至 6～8 范圍內(nèi)。蒸餾水定容至 2mL，取上清待測(cè)。

注意事項(xiàng)：
1、 OD 值大于 1.0，樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2、試劑有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，防止吸入或與皮膚接觸。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算時(shí)，需單獨(dú)提取樣本中的蛋白質(zhì)并測(cè)定。

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