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血清總蛋白質(zhì)的測定辦法

時間:2016-7-26閱讀:106
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1、凱氏定氮法仍然是樹立各個具體辦法時選用的參閱規(guī)范辦法。ELISA試劑盒
2、雙縮脲比色法是現(xiàn)在首要引薦的蛋白質(zhì)定量辦法。辦法操作簡潔,盡管雙縮脲試劑有大同不異。其間酒石酸鉀納能夠穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子,富含碘化物作為抗氧化劑。雙縮脲反響生成的復(fù)合物其吸收峰為540nm。可選用*的規(guī)范牛血清白蛋白作為規(guī)范品,經(jīng)準(zhǔn)確稱量,必要時用凱氏定氮法標(biāo)定。各地質(zhì)控基地供給的混合規(guī)范血清可作為第二參閱,血清用量100μl,在10-120g/L濃度范圍內(nèi)呈杰出線性關(guān)系,批內(nèi)CV值<2%,其它常用的辦法還有:
3、根據(jù)蛋白分子中富含酪氨酸和色氨酸而運用的酚試劑比色法因為各種蛋白質(zhì)分子中上述兩種氨基酸的構(gòu)成份額不一樣,特別是白蛋白含色氨酸為0.2%,而γ-球蛋白中含量達(dá)2%-3%,致使較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中參加Cu2++,集華夏法和雙縮脲反響兩者的作用,使呈色靈敏度進(jìn)步。其間75%的呈色依賴于Cu2++。反響產(chǎn)品吸收峰在650-750nm,辦法靈敏度為雙縮脲辦法的100倍擺布。有利于檢查較微量的蛋白質(zhì)。但試劑反響仍易受多種化合物的攪擾。ELISA試劑盒
4、選用280nm和215/225紫外吸收值,核算蛋白質(zhì)含量 280nm 是因為蛋白質(zhì)分子中存在芳香族氨基酸所致。辦法的特異性和準(zhǔn)確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量份額影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm鄰近有攪擾。紫外區(qū)200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍,將血清稀釋1000-2000倍能夠消除攪擾物質(zhì)的影響。
5、選用沉積反響進(jìn)行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方,此辦法甚為簡潔,不需特別儀器,技能關(guān)鍵在于:①選擇試劑濃度及溫度;②混勻技能;③選用的規(guī)范;④待測標(biāo)本中的蛋白濃度。
6、染料法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異,如氨基黑(amino black)與考馬亮藍(lán)(comassive brilliant blue )。這一性質(zhì)除了能夠用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色,亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺點是多種蛋白質(zhì)與染料的力不一致??捡R亮藍(lán)在與蛋白質(zhì)后的吸收峰從465nm移向595nm,這一性質(zhì)可用分光光度法來定量檢查。

c-Abl    非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體
CCDC152    卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白152抗體
CHPT1    甘油二酯膽堿磷酸轉(zhuǎn)移酶抗體
Chromogranin B    嗜鉻粒素B抗體
Cullin 5    血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體
Cyp2-j3    細(xì)胞色素P450Ⅱj3抗體
CLCA4    鈣激活氯離子通道4抗體
CDK6    周期素依賴性激酶6抗體

ELISA試劑盒

 

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