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ELISA法細(xì)胞凋亡檢測(cè)操作步驟

時(shí)間:2016-5-10閱讀:150
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   ELISA試劑盒細(xì)胞凋亡的發(fā)生是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp~200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。
ELISA法細(xì)胞凋亡檢測(cè)操作步驟:
1.收集細(xì)胞,離心后,用200µl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。(培養(yǎng)細(xì)胞的上清液、血漿和血清都可作為檢測(cè)樣本)
2.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。
3.加入80µl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD、抗組蛋白-生物素及溫育緩沖液(按1︰1︰18混合),室溫下孵育2h(置搖床上,250r/min)。
4.取上清,用300µl溫育緩沖液洗滌3次,小心移去洗滌液。
5.加入100µl底物緩沖液,室溫下孵育使顏色變化至適合(置搖床上)。
6.盡快作比色分析(10min~20min內(nèi)),用底物緩沖液作空白對(duì)照,以波長(zhǎng)405nm,參考波長(zhǎng)492nm進(jìn)行檢測(cè)。

APBB1 interacting protein 1    β淀粉樣蛋白前體結(jié)合蛋白B-1抗體
alpha Adducin    內(nèi)收蛋白a1抗體
Alpha 2 antiplasmin     α2纖溶酶色素上皮衍生因子抗體
Annexin A7    膜粘連蛋白7抗體
APH1a    早老素γ分泌酶抗體
ATP1A1    鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
GEF H1    Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體
phospho-GEF H1(Ser885)    磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體
ADAM9    去整合素樣金屬蛋白酶9抗體
ANKHD1    艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體
Adenylate cyclase 1    腺苷酸環(huán)化酶1抗體
ABCE1    核糖核酸酶L抑制蛋白抗體
ARHGAP24    Rho GTP酶激活蛋白24抗體
ASAP3    GTP酶激活蛋白ASAP3抗體

ELISA試劑盒

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