酶聯(lián)法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體
 
    [檢測(cè)方法]  ELISA法
    [方法學(xué)原理]  用精制的基因工程表達(dá)的梅毒螺旋體特異性抗原包被固相載體，加患者血清后，如患者血清中有相應(yīng)抗體，可形成抗原抗體復(fù)合物。在此基礎(chǔ)上加入酶標(biāo)記抗原，即可形成抗原—抗體—酶標(biāo)記復(fù)合物。再加入酶底物，底物經(jīng)酶分解后顯色，即為陽(yáng)性反應(yīng)。反之，若患者血清中無(wú)相應(yīng)抗體，則酶標(biāo)記抗原就不能與包被抗原相結(jié)合，從而加入酶底物不會(huì)顯色，此為陰性反應(yīng)。
    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  靜脈血2ml，不抗凝。
    [試劑]
    1．TP酶標(biāo)板
    2．TP陽(yáng)性對(duì)照
    3．TP陰性對(duì)照
    4．TP酶標(biāo)試劑
    5．顯色劑A
    6．顯色劑B
    7．終止液
    8．濃縮洗滌液
    [儀器]  酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
    [檢測(cè)步驟]
    1．配制洗滌液  將50ml濃縮洗滌液(20X)用蒸餾水或去離子水稀釋至1 000ml備用。
    2．根據(jù)標(biāo)本數(shù)量，將酶標(biāo)板條固定于板架上，每板設(shè)陰性對(duì)照2孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步相同)。
    3．加酶  每孔加100gl酶標(biāo)試劑。
    4．加樣  分別在相應(yīng)孔中加入待檢樣品，陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照20u1，振蕩混勻。
    5．溫育  用封板膜封板后，置37℃環(huán)境中溫育60min。
    6．洗滌  小心將封板膜揭掉，用洗滌液充分洗滌6遍，zui后一次盡量拍干。
    7．顯色  每孔加顯色劑A、B各50ul，輕輕混勻，用封板膜封板后置37℃環(huán)境中避光顯色15min。  
    8．測(cè)定  每孔加終止液50gl，混勻，以空白調(diào)零點(diǎn)，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD值。
    [結(jié)果判定]
    1．臨界值(cutoff)計(jì)算cutoff＝陰性對(duì)照孔OD均值+0．18。
    2．陽(yáng)性判定  樣品OD值≥cut off值為梅毒螺旋體抗體陽(yáng)性。
    3．陰性判定  樣品OD值