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其他生化試劑實(shí)驗(yàn)原理:
將目標(biāo)抗體包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標(biāo)抗體,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標(biāo)記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。
其他生化試劑標(biāo)本要求:
1. 血清:溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或其他作為其他生化試劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3. 尿液:無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。標(biāo)本的保存
一般說來,在 5 天內(nèi)測(cè)定的標(biāo)本可放置于 4℃,超過一周測(cè)定的需低溫凍存。 對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在 4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時(shí), -20 ℃ 可保存 1 個(gè)月。 -70 度可保存 6 個(gè)月。部分標(biāo) 本也可加入適當(dāng)防腐劑,激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
其他生化試劑性能:
1. 靈敏度:小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。其他生化試劑-ⅢELISA檢測(cè)試劑盒稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
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