動(dòng)物單個(gè)細(xì)胞的獲得
組織的獲得采用各種適宜的方法處死動(dòng)物,取出組織塊放入小燒杯中,用剪刀將組織塊剪碎成1mm3大小,用吸管吸取Hanks溶液沖下剪刀上的碎塊,補(bǔ)加3-5ml的Hanks溶液,用吸管輕輕吸打,低速離心,棄去上清液,留下組織塊。組織的消化通過生物化學(xué)的方法將剪碎的組織塊分散成細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞。根據(jù)不同的組織對(duì)象采用不同的酶消化液。如zui常用的有胰蛋白酶和膠原酶等。膠原酶是一種由細(xì)菌中提取的酶,對(duì)膠原和細(xì)胞間質(zhì)有較強(qiáng)的消化作用,適用于消化纖維組織、上皮組織、癌組織等。其他的酶如鏈霉蛋白酶、粘蛋白酶、蝸牛酶等也可用于動(dòng)物細(xì)胞的消化。EDTA消化傳代細(xì)胞,常與胰蛋白酶使用。(1)向培養(yǎng)瓶中放入1-5mm3大小的組織塊,加5ml2000單位/ml的膠原酶干液,zui終濃度為200單位/ml,pH=6.5。(2)36.5℃水浴4-48小時(shí),無需搖動(dòng),中間可更換酶液一次。(3)當(dāng)組織變軟,分散于瓶底時(shí),輕輕震蕩即散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,小心倒出培養(yǎng)液。(4)800r/min離心5分鐘,棄上清液,重新懸浮BSS溶液中,再離心一次。(5)加入培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液。
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