簡述牛腫瘤壞死因子αELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)操作
　　
　　試驗(yàn)原理：
　　
　　TNF-α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知TNF-α濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將TNF-α和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-α的濃度呈比例關(guān)系。
　　
　　操作注意事項(xiàng)：
　　
　　l試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
　　
　　l實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
　　
　　l不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
　　
　　l使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
　　
　　l使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
　　
　　l底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。牛腫瘤壞死因子αELISA試劑盒底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
　　
　　l加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
　　
　　按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
　　
　　安全性：
　　
　　1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
　　
　　2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
　　
　　3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
　　
　　操作步驟：
　　
　　1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
　　
　　2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
　　
　　3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
　　
　　4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　5．每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
　　
　　6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，牛腫瘤壞死因子αELISA試劑盒振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
　　
　　8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
　　
　　在450nm波長處測定各孔的OD值。
　　
　　牛腫瘤壞死因子αELISA試劑盒