(一)　原理
　　蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度是由蛋白質(zhì)周圍親水基團(tuán)與水形成水化膜的程度，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。當(dāng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，中性鹽對(duì)水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時(shí)，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后，由于離子強(qiáng)度發(fā)生改變，蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和，更加導(dǎo)致蛋白溶解度降低，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。
　　(二)　主要材料
　　1.　試劑:
　　(1)　正常人混合血清；滅菌生理鹽水。
　　(2)　飽和硫 酸銨溶液的配制:
　　稱(NH4)2SO4(AR)400～425克，以50～80℃之蒸餾水500ml溶解，攪拌20分鐘，趁熱過(guò)濾。冷卻后以濃氨水(15N　NH4OH)調(diào)PH至7.4。配制好的飽和硫 酸銨，瓶底應(yīng)有結(jié)晶析出。
　　(3)　萘氏試劑配制：
　　稱HgI11.5克，KI8克，加蒸餾水至50ml，攪拌溶解后，再加入20％NaOH 50ml。
　　(4)　0.02M, PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液(Phosphate Buffered Saline PBS)配制:
　　貯存液:
　　A液：0.2M Na2HPO4：Na2HPO4·12H2O 71.64克，加蒸餾水至1000ml；
　　B液: 0.2M NaH2P4：NaH2P4·2H２O 3.12克，加蒸餾水至1000ml；
　　應(yīng)用液：取A液81ml加B液19ml混合，再以生理鹽水作10倍稀釋即成。
　　(5)　0.1M, PH7.4磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer PB)配制:
　　將上述A液取81ml與B液19ml混合，再以蒸餾水對(duì)倍稀釋即成。
　　(6)　20％磺基水楊酸。
　　2.　器材:
　　普通冰箱、離心機(jī)、電磁攪拌器，751桮型紫外分光光度計(jì)、扭力天平，粗天平。
　　透析袋、尼龍繩、細(xì)竹棒、精密PH試紙(PH5.5～9.0)、眼科鑷子、小剪刀。
　　燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。
　　(三)　鹽析的操作步驟
　　　取正常人混合血清加等量生理鹽水，于攪拌下逐滴加入與
　　　稀釋血清等量的飽和硫 酸銨[終濃度為50％飽和(NH4)2SO4]
　　　　　　　　　　　↓4℃，3小時(shí)以上，使其充分沉淀
　　　離心(3000rpm), 20分鐘，棄上清，以生理鹽水溶解沉淀至Xml。
　　　再逐滴加飽和硫 酸銨Ｘ/２ml
　　　　　　　　　　　↓置4℃，3小時(shí)以上［此時(shí)(NH4)2SO4的飽和度為33％)］
　　　重復(fù)上述第二步過(guò)程1?次。將末次離心后所得沉淀物以0.02M
　　　PH7.4 PBS溶解至Xml裝入透析袋。
　　　　　　　　　　　│對(duì)PBS充分透析、除鹽換液3次，
　　　　　　　　　　　↓至萘氏試劑測(cè)透析外液為無(wú)黃色
　　　將透析袋內(nèi)樣品取少許作適當(dāng)倍數(shù)稀釋后，以751-G紫外分光光計(jì)測(cè)蛋白含量。
　　　方法如下:
　　　　　蛋白含量(mg／ml)＝(1.45×OD280nm-0.74×OD260nm)×樣品稀釋度。
　　　　　注：式中1.45與0.74為常數(shù)，nm為波長(zhǎng)。
　　(四)　影響鹽析的因素
　　1.　蛋白質(zhì)的濃度：鹽析時(shí)，溶液中蛋白質(zhì)的濃度對(duì)沉淀有雙重影響，既可影響蛋白質(zhì)沉淀極限，又可影響蛋白質(zhì)的共沉作用。蛋白質(zhì)濃度愈高，所需鹽的飽和度極限愈低，但雜蛋白的共沉作用也隨之增加，從而影響蛋白質(zhì)的純化。故常將血清以生理鹽水作對(duì)倍稀釋后再鹽析。
　　2.　離子強(qiáng)度:各種蛋白質(zhì)的沉淀要求不同的離子強(qiáng)度。例如當(dāng)硫 酸銨飽和度不同，析出的成分就不同，飽和度為50％時(shí)，少量白蛋白及大多數(shù)擬球蛋白析出；飽和度為33％時(shí)γ球蛋白析出。
　　3.　鹽的性質(zhì)：zui有效的鹽是多電荷陰離子。
　　4.　PH值：一般說(shuō)來(lái)，蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多，它的溶解度越大。改變PH改變蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)，也就改變了蛋白質(zhì)的溶解度。
　　5.　溫度：鹽析時(shí)溫度要求并不嚴(yán)格，一般可在室溫下操作。血清蛋白于25℃時(shí)較0℃更易析出。但對(duì)溫度敏感的蛋白質(zhì)，則應(yīng)于低溫下鹽析。
　　6.　蛋白質(zhì)沉淀后宜在4℃放3小時(shí)以上或過(guò)夜，以形成較大沉淀而易于分離。