RT-PCR反應體系酶的選擇

反轉錄酶的選擇：
1． Money 鼠白血病病毒（MMLV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性，RNA酶H活性相對較弱。zui適作用溫度為37℃。! Z  T3 Z: v% Y$ P* ?
2． 禽成髓細胞瘤病毒（AMV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性和RNA酶H活性。zui適作用溫度為42℃。） F# O8 W9 A% O
3． Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩(wěn)定性反轉錄酶：在Mn2+存在下，允許高溫反轉錄RNA，以消除RNA模板的二級結構。
4． MMLV反轉錄酶的RNase H-突變體：Invitrogen公司商品名為SuperScript 和SuperScriptⅡ。此種酶較其它酶能多將更大部分的RNA轉換成cDNA，這一特性允許從含二級結構的、低溫反轉錄很困難的mRNA模板合成較長cDNA。
擴增酶的選擇:
1． 對于小于4kb的產物使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶。' o1 U3 |8 F* C$ B
2． 對于小于12kb的產物使用Platinum Pfx Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。
3． 對于大于12kb的產物使用ELONGAE或Enzyme Mix。
4． 對于一步法RT-PCR，如果產物小于3.5kb，使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶；如果產物小于9kb，使用Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。