1磷酸鈣共沉淀將氯化鈣,RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合,沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒.磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細(xì)胞膜并通過胞飲進(jìn)入目的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì).沉淀物的大小和質(zhì)量對于磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功至關(guān)重要.在實(shí)驗(yàn)中使用的每種試劑都必須小心校準(zhǔn),保證質(zhì)量,因?yàn)樯踔疗x*條件十分之一個(gè)pH都會(huì)導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗.
2電穿孔法電穿孔通過將細(xì)胞暴露在短暫的高場強(qiáng)電脈沖中轉(zhuǎn)導(dǎo)分子.將細(xì)胞懸浮液置于電場中會(huì)誘導(dǎo)沿細(xì)胞膜的電壓差異,據(jù)認(rèn)為這種電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜暫時(shí)穿孔.電脈沖和場強(qiáng)的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要,因?yàn)檫^高的場強(qiáng)和過長的電脈沖時(shí)間會(huì)不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞.一般,成功的電穿孔過程都伴隨高水平(50%或更高)的毒性.
3DEAE-葡聚糖和polybrene帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復(fù)合物和帶負(fù)電的DNA分子使得DNA可以結(jié)合在細(xì)胞表面.通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復(fù)合體導(dǎo)入.兩種試劑都已成功用于轉(zhuǎn)染.DEAE-葡聚糖于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染.
4陽離子脂質(zhì)體試劑在優(yōu)化條件下將陽離子脂質(zhì)體試劑加入水中時(shí),其可以形成微小的(平均大小約100-400nm)單層脂質(zhì)體.這些脂質(zhì)體帶正電,可以靠靜電作用結(jié)合到DNA的磷酸骨架上以及帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面.因此使用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與以前利用中性脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理不同.使用陽離子脂質(zhì)體試劑,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物.據(jù)稱,一個(gè)約5kb的質(zhì)粒會(huì)結(jié)合2-4個(gè)脂質(zhì)體.被俘獲的DNA就會(huì)被導(dǎo)入培養(yǎng)的細(xì)胞.現(xiàn)存對DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)原理的證據(jù)來源于內(nèi)吞體和溶酶體.