目前，ELISPOT已被用于檢測藥物、化學(xué)制劑及其它CK復(fù)合物的特性及功能等方面,因此為體內(nèi)免疫功能的調(diào)節(jié)效應(yīng)提供了檢測依據(jù)。近幾年來, ELISPOT技術(shù)在腫瘤疫苗評(píng)價(jià)試驗(yàn)、免疫監(jiān)測及免疫學(xué)研究中越來越被廣泛地使用。
在抗腫瘤免疫及相關(guān)領(lǐng)域中的應(yīng)用
在許多研究中,該技術(shù)已被用于免疫動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞中抗原特異的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）的數(shù)量檢測。近期,ELISPOT技術(shù)已用于分析和評(píng)價(jià)從傳染病病人的PBMC中檢測肽特異的T淋巴細(xì)胞以及在癌癥病人中誘導(dǎo)腫瘤特異的T細(xì)胞的疫苗試驗(yàn)。
ELISPOT檢測T細(xì)胞反應(yīng)時(shí)敏感性、特異性和可重復(fù)性都很高,操作簡單迅速,需要少量標(biāo)本,在檢測抗原特異性細(xì)胞數(shù)量的同時(shí)也反應(yīng)其功能,并與臨床結(jié)果相關(guān)。ELISPOT平板可以提前大量準(zhǔn)備,移液、洗板和讀板都可自動(dòng)化,因而大批量檢查也可做到快速。在與與其他方法的比較后,ELISPOT很可能成為定量分析腫瘤或病毒特異性的T細(xì)胞反應(yīng)的。
在抗感染免疫中的應(yīng)用
CTL在抗病毒感染的免疫應(yīng)答中占有主要地位,而CD4+輔助性T細(xì)胞亞群Th1/Th2的平衡在抵御病毒感染中起著同樣重要的作用。在HIV研究方面,由MHC-1類分子加工的不同抗原經(jīng)CTL識(shí)別并產(chǎn)生免疫應(yīng)答在控制HIV-1感染中同樣起重要作用。利用ELISPOT方法檢測CK如IFN2γ就可以進(jìn)一步了解到針對(duì)HIV特異的CTL應(yīng)答及相關(guān)免疫信息。
此外,ELISPOT法還用于評(píng)價(jià)由HIV-1感染引起粘膜的CD4+T細(xì)胞免疫應(yīng)答以及HIVgp 120g與霍亂毒素共表達(dá)的DNA疫苗的免疫源性。在其他研究中,ELISPOT還用來檢測通過直腸免疫低劑量甲肝疫苗而產(chǎn)生的細(xì)胞免疫應(yīng)答。在急性的自限性肝炎中,以Th1為主的應(yīng)答促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫,且在控制病毒感染及延緩慢性疾病的發(fā)展方面有重要作用。
在許多抗細(xì)菌免疫研究中,該方法也發(fā)揮了重要作用。例如：應(yīng)用ELISPOT試驗(yàn)證實(shí)表達(dá)大腸桿菌MalE蛋白的重組卡介苗（rBCG.MalE）誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答是CD4+T細(xì)胞依賴的,rBCG.MalE 誘導(dǎo)的特異CD4+T細(xì)胞應(yīng)答存在Th1/Th2平衡轉(zhuǎn)換現(xiàn)象,并逐步形成Th1/ Th2 混合應(yīng)答。
細(xì)胞因子檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用
目前，已經(jīng)實(shí)現(xiàn)臨床檢驗(yàn)的領(lǐng)域是對(duì)肺結(jié)核（TB）的檢測。而zui近的研究熱點(diǎn)就是對(duì)于移植的預(yù)測。受體對(duì)供體特異性HLA抗體一直以來都是*的一大障礙,因?yàn)樗鼈兊拇嬖诓粌H介導(dǎo)超急性排斥反應(yīng)而且還可導(dǎo)致急性排斥反應(yīng)。因此,HLA抗體的存在限制了異體抗原敏感患者對(duì)供體器官的需要,因而增加了等待移植的時(shí)間。在心臟,肝臟和腎臟異體移植后早期出現(xiàn)的并發(fā)癥如急性排斥反應(yīng)與移植前存在的異體免疫臨床相關(guān)性迫切需要一種恰當(dāng)?shù)臋z測方法在*前能了解受體對(duì)供體特異性體液免疫的功能狀態(tài)。
在接受移植的人群中，部分因有多次輸血、或既往有異體移植失敗或多次妊娠史體內(nèi)曾經(jīng)存在陽性異體抗體,在他們接受異體移植時(shí),現(xiàn)有的檢測方法只能顯示他們對(duì)異體的免疫功能正常。但他們體內(nèi)存在記憶B淋巴細(xì)胞,一旦受到相應(yīng)HLA 抗原的刺激則會(huì)喚起免疫反應(yīng),這不僅影響著移植的結(jié)果,甚至?xí)霈F(xiàn)危及患者生命的、與移植相關(guān)的并發(fā)癥。
ELISPOT是一種強(qiáng)有效的檢測單個(gè)抗體分泌細(xì)胞的方法,具有很高的敏感性。因此,刺激記憶B淋巴細(xì)胞增殖、分化成漿細(xì)胞,并建立一種特異性ELISPOT方法檢測HLA抗體產(chǎn)生細(xì)胞是*手段。 如果ELISPOT要進(jìn)一步推廣應(yīng)用，特別是臨床應(yīng)用，其標(biāo)準(zhǔn)化將是一個(gè)十分重要的問題。美國FDA和NIH等已經(jīng)開始建立ELISPOT的標(biāo)準(zhǔn)化流程，相信隨著ELISPOT技術(shù)的成熟、標(biāo)準(zhǔn)化程序的建立，它的應(yīng)用將更加廣泛。