因此在ELISA試劑盒測(cè)定中試劑的預(yù)備zui為樞紐的是，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。加血清樣本及反應(yīng)試劑在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為樞紐的一個(gè)因素。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。

    如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值泛起：生長(zhǎng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開(kāi)釋，因此，在測(cè)定此類激素時(shí)，ELISA試劑盒要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以知足測(cè)定要求。再如治療藥物的檢測(cè)，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè)。

    溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，ELISA試劑盒不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。