一、免疫安排化學(xué)染色方法
1、按符號(hào)物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶(首要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2、按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法比較，間接法的靈敏度提高了許多。
 

3、按結(jié)合辦法可分為抗原—抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)法和親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等，其間SP法是zui常用的辦法。

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二、免疫組化技能的基本原理

使用免疫學(xué)及安排化學(xué)原理，對(duì)安排切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研討，這種技能稱為免疫安排化學(xué)技能或免疫細(xì)胞化學(xué)技能。
 

*，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是運(yùn)用這一特性，即先將安排或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等試驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體，再用這種抗體(*抗體)作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體，并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原擴(kuò)大，因?yàn)榭贵w與抗原結(jié)合后構(gòu)成的免疫復(fù)合物是無色的，因此，還必須借助于安排化學(xué)辦法將抗原抗體反響部位顯現(xiàn)出來(常用顯色劑DAB顯現(xiàn)為棕顆粒)。

通過抗原抗體反響及呈色反響，顯現(xiàn)細(xì)胞或安排中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)作的抗原抗體反響產(chǎn)品，然后能夠在細(xì)胞或安排原位確認(rèn)某些化學(xué)成分的散布、含量。安排或細(xì)胞中但凡能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。?

三、幾種常用免疫安排化學(xué)辦法的原理

1、免疫熒光方法
是zui早樹立的免疫安排化學(xué)技能。它運(yùn)用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或安排內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下調(diào)查。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出必定波長的熒光，然后可確認(rèn)安排中某種抗原的定位，從而還可進(jìn)行定量分析。因?yàn)槊庖邿晒饧寄芴禺愋詮?qiáng)、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中使用比較廣。

2、免疫酶標(biāo)方法

免疫酶標(biāo)辦法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技能?；驹硎窍纫悦阜?hào)的抗體與安排或細(xì)胞效果，然后參加酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)品或具有必定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研討。免疫酶標(biāo)技能是現(xiàn)在zui常用的技能。
本辦法與免疫熒光技能比較的首要長處是：定位精確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長期保存，合適于光、電鏡研討等。
免疫酶標(biāo)辦法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種符號(hào)辦法，且跟著辦法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，運(yùn)用也越來越便利?，F(xiàn)在在病理診斷中廣為運(yùn)用的當(dāng)屬PAP法、ABC法、SP法等。

3、免疫膠體金技能

免疫膠體金技能是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為符號(hào)物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有顯著的影響。因此，用膠體金符號(hào)一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對(duì)安排或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，乃至定量研討。因?yàn)槟z體金有不同巨細(xì)的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技能特別合適于免疫電鏡的單符號(hào)或多符號(hào)定位研討。因?yàn)槟z體金自身呈淡至深赤色，因此也合適進(jìn)行光鏡調(diào)查。如使用銀加強(qiáng)的免疫金銀規(guī)律更便于光鏡調(diào)查。

四、免疫組化技能的優(yōu)點(diǎn)

1、特異性強(qiáng) 

免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是安排細(xì)胞中抗原的特定顯現(xiàn)，如角蛋白(keratin)顯現(xiàn)上皮成分，LCA顯現(xiàn)淋巴細(xì)胞成分。只要當(dāng)安排細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)呈現(xiàn)交叉反響。

2、敏感性高 

在使用免疫組化的開始階段，因?yàn)榧寄苌系募s束，只要直接法、間接法等敏感性不高的技能，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在因?yàn)锳BC法或SP法的呈現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍乃至上億倍仍可在安排細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反響，使免疫組化辦法越來越便利地使用于常規(guī)病理診斷工作。

3、定位精確、形狀與功用相結(jié)合 

該技能通過抗原抗體反響及呈色反響，可在安排和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的精確認(rèn)位，因此可一起對(duì)不同抗原在同一安排或細(xì)胞中進(jìn)行定位調(diào)查，這樣就可以進(jìn)行形狀與功用相結(jié)合的研討，對(duì)病理學(xué)研討的深入是非常有意義的。