我公司為感謝朋友們長(zhǎng)期以來(lái)的支撐與厚愛(ài)，特選在端午前為咱們*共享：elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的經(jīng)歷。以下是我公司技術(shù)人員總結(jié)出的小經(jīng)歷供咱們參閱：
包被原的性質(zhì)很重要
 這關(guān)系到做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保存抗原很重要，做重組蛋白時(shí)，要在冰浴下緩慢消融。還有有的包被原可能不是蛋白，關(guān)于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)咱們要事前對(duì)其改造再加以包被。
1、親和素生物素：先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
2、脂類(lèi)物質(zhì)：可將其在有機(jī)溶劑中溶解后參加ELISA板孔中，開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或涼風(fēng)吹干，待酒精蒸發(fā)后，讓脂質(zhì)天然干固在固相外表。
3、小分子有必要依托和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
 包被液的挑選
  因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附對(duì)錯(cuò)特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體外表。具體的實(shí)驗(yàn)還要有鞏固的理論外也要實(shí)踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了方才說(shuō)到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
加抗體標(biāo)本(和二抗)
留意該換槍頭時(shí)換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋?zhuān)部捎梅忾]液去稀釋。如需加二抗，還要留意二抗的作業(yè)濃度，太低則上色淺。
顯色
我們一開(kāi)始做的時(shí)分，要挑選適合的顯色體系。留意顯色體系酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。每次做盡量要把陰陽(yáng)空三個(gè)對(duì)照做好，如出現(xiàn)問(wèn)題也好剖析。