一、原理
細(xì)胞在培育瓶長(zhǎng)成細(xì)密單層后，已基本上飽滿，為使細(xì)胞能持續(xù)生長(zhǎng)，一起也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)展，就必須進(jìn)行傳代（再培育）。
傳代培育也是一種將細(xì)胞種保存下去的辦法。一起也是使用培育細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)進(jìn)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才干分瓶。
二、材料和試劑
1、細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株
2、試劑：0.25％胰酶、1640培育基（含10％小牛血清）
3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培育箱、培育瓶、吸管、廢液缸等
三、操作過程
1、將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培育瓶中本來的培育液棄去。
2、參加0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下調(diào)查細(xì)胞。跟著時(shí)刻的推移，原貼壁的細(xì)胞逐步趨于圓形，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，參加10ml培育液停止消化。
調(diào)查消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并呈現(xiàn)細(xì)針孔空地時(shí)停止消化。一般室溫消化時(shí)刻約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培育液塞好橡皮塞，置37℃下持續(xù)培育。第二天調(diào)查貼壁生長(zhǎng)情況。
附：消化液制造辦法：
稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），參加100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可參加EDTA，使終究濃度達(dá)0.02％。