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色譜柱

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詳細(xì)介紹

色譜柱的使用：
色譜柱是昂貴的色譜耗材，正確的使用和維護(hù)對(duì)保證色譜柱的正常使用和延長(zhǎng)壽命至關(guān)重要。
1、色譜柱使用前注意事項(xiàng)：
○1色譜柱內(nèi)的存儲(chǔ)液：
色譜柱看的存儲(chǔ)液，如沒有特殊說(shuō)明均為質(zhì)檢報(bào)告中所述流動(dòng)相，
氨基（NH2）、氰基（CN）、硅膠柱（SiO2）均為正相條件–正己烷/異丙醇體系，反相柱（C1、C4、C8、C18、苯基Phenyl）均為甲醇/水體系，檢測(cè)前，請(qǐng)用相互溶的試劑將其替換；
○2新色譜柱的平衡：
新反相色譜柱：用純甲醇沖洗色譜柱30個(gè)柱體積，再更換成能與檢測(cè)流動(dòng)相互溶的流動(dòng)相沖洗30個(gè)柱體積，最后用流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)；
新的正相色譜柱：用異丙醇0.5ml/min沖洗30個(gè)柱體積，再更換成檢測(cè)流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)；
○3流動(dòng)相和樣品保持潔凈：
由于懸浮在樣品或流動(dòng)相中的細(xì)小顆粒會(huì)堵塞色譜柱兩端的篩板，各種試劑盡量使用色譜純級(jí)的，用量少的試劑純度至少是分析純，水是超純水和全玻璃器皿雙蒸水，使用前建議用0.45μm的濾膜過(guò)濾；樣品溶液使用針筒過(guò)濾；
樣品中的雜質(zhì)是造成色譜柱污染、柱效下降的最主要原因之一，復(fù)雜樣品可選樣品預(yù)處理柱（SPE柱）進(jìn)行樣品處理，如果不方便處理，使用相匹配的保護(hù)柱，樣品溶劑與流動(dòng)相要相匹配，不能出現(xiàn)樣品不互溶，極性相差太大等想象，否則會(huì)造成色譜峰形變差，鬼峰等現(xiàn)象，使用流動(dòng)相溶解樣品能有效的避免上述情況發(fā)生；
○4色譜柱允許使用的pH范圍：
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH范圍，請(qǐng)仔細(xì)對(duì)照你的色譜柱的使用pH范圍，在pH范圍以外使用，會(huì)使硅膠基質(zhì)溶解或鍵合相水解，對(duì)色譜柱造成不可恢復(fù)的損傷，如果在臨界pH處使用，分析結(jié)束后立即用適合于色譜柱保存并與當(dāng)前使用的流動(dòng)相互溶的淋洗液置換掉。
表一

色譜柱型號(hào)	C8	C18	NH	CN
pH耐受范圍	2-10.0	2-10.0	1.5-9	1.5-8.5

色譜柱的保存：
○1短時(shí)間保存：使用間隔不超過(guò)四天，色譜柱按平時(shí)維護(hù)程序沖洗至基線平穩(wěn)，反相色譜柱保存在不帶有緩沖鹽、離子對(duì)試劑的有機(jī)相/水溶液中，有機(jī)相不低于20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用保存在純有機(jī)溶劑中；并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
○2長(zhǎng)期保存：反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時(shí)需將柱內(nèi)存儲(chǔ)液用異丙醇置換，最后用正己烷保存；將色譜柱從儀器上取下，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
色譜柱的維護(hù)：
1、柱壓升高是每個(gè)色譜工作者都很頭疼的問(wèn)題，長(zhǎng)時(shí)間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正?，F(xiàn)象；短時(shí)間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高，排除儀器的故障，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點(diǎn)：
○1柱頭的過(guò)濾篩板污染（固體顆粒物堵塞、強(qiáng)保留物質(zhì)累積）：
解決方法：
a、在柱前端加上在線過(guò)濾器或保護(hù)柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向沖洗色譜柱180min；
b、在柱前端加上在線過(guò)濾器或保護(hù)柱，反向使用；
c、可將柱頭打開，將色譜柱頭中過(guò)濾篩板取出，在稀硝酸溶液內(nèi)超聲清洗20min，純水超聲清洗20min，最后用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱；
○2柱頭填料污染（固體顆粒物堵塞、強(qiáng)保留物質(zhì)累積）：
解決方法：
a、用可以溶解污染物的溶劑較長(zhǎng)時(shí)間（180min）反向沖洗色譜柱；
b、可將柱頭打開，小心取出被污染的填料，用相同的填料重新裝入修復(fù)；
○3pH使用不當(dāng)造成的損傷：
解決方法：
pH使用不當(dāng)造成固定相的缺失或塌陷，很難使色譜柱恢復(fù)，只能更換色譜柱。
2、使用保護(hù)柱和在線過(guò)濾器：
樣品和流動(dòng)相中不能過(guò)濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產(chǎn)生的固體顆粒物，進(jìn)入到色譜柱中就會(huì)堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高，柱效下降，保護(hù)柱和在線過(guò)濾器上都有篩板，孔徑與分析柱的孔徑相同，能阻止顆粒物到達(dá)色譜柱，在分析故障中，柱壓升高占很大比例，因此建議您在色譜柱前端加上在線過(guò)濾器或者保護(hù)柱；
3、緩沖鹽的正確使用：
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，其使用不當(dāng)會(huì)析出，加快泵柱塞桿和密封圈，流通閥的磨損，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的間隙，使填料板結(jié)柱壓升高，阻礙基質(zhì)上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩沖鹽析出后很難去除，因此正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命非常重要，具體方法如下：
☆使用前過(guò)渡。使用后沖洗
○1等度條件：分析前后用過(guò)渡流動(dòng)相沖洗柱體積不少于20-30個(gè)柱體積，或分析完成后用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min（根據(jù)柱規(guī)格調(diào)整）沖洗過(guò)夜；
○2梯度條件：分析前，用與初始流動(dòng)相組成相同的流動(dòng)相以分析流速?zèng)_洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積，分析后，用該過(guò)渡流動(dòng)相沖洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積，且梯度盡量平緩，避免緩沖鹽析出。
*過(guò)渡流動(dòng)相：有機(jī)相和水相的比例和分析流動(dòng)相中兩相比例一致或者水相比例高于分析流動(dòng)相，不含緩沖鹽。
○3避免強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱保留：強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個(gè)緩慢的過(guò)程，一段時(shí)間后會(huì)對(duì)樣品成分產(chǎn)生額外的保留行為，引起峰變寬，拖尾，使柱效下降，保留時(shí)間變化，到一定程度時(shí)會(huì)導(dǎo)致柱壓升高，對(duì)許多樣品特別是復(fù)雜樣品很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要預(yù)防這一切的方式，堅(jiān)持每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上
清洗方法：
a、未使用緩沖鹽，每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上；
b、使用緩沖鹽，用上述方法去除緩沖鹽后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上；
*注意：不要輕易打開柱頭，因?yàn)橹^一旦打開，很難恢復(fù)到新柱的水平，因?yàn)橹^打開而造成的檢測(cè)后果，客戶自行負(fù)責(zé)。

關(guān)鍵詞：玻璃器皿

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