Elisa實驗：實驗時ELISA競爭法檢測抗-HBe

　　ELISA方法學(xué)在實驗中運用的很廣泛，5個實驗3個實驗都是用ELISA法檢測的，對于ELISA實驗中也是有多種方法學(xué)可以選擇的，我們著重的講解下ELISA實驗中競爭法檢測抗-HBe，先來跟隨古朵生物小編了解一下實驗原理吧!

　　一、實驗原理

　　用抗-HBe包被固相載體后，同時加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg，若被檢血清中含有抗-HBe，則與包被抗-HBe競爭結(jié)合HBeAg，被檢標本中抗-HBe越多，HBeAg被結(jié)合越多，而與包被抗-HBe結(jié)合就越少，加底物后顯色就越淺;反之越深。

　　二、主要試劑與器材

　　ELISA試劑盒：內(nèi)含已包被抗-HBe板條、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液、陽性和陰性對照血清，底物溶液(A液、B液)、終止液、洗滌液。

　　三、結(jié)果分析

　　1.P/N≤0.3為陽性。P/N>0.3為陰性。

　　2.P/N=待檢血清OD值/陰性對照OD值。

　　四、注意事項

　　1.試劑置2-4℃保存。取用時應(yīng)先置室溫平衡。干包被板條須密封防潮，凍存，取用后余者及時封存。

　　2.恰當選好HBeAg的濃度。

　　3.試劑用前應(yīng)搖勻。

　　五、操作步驟

　　1.加樣：取出干包板條，按編號順序分別加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清于相應(yīng)孔中。設(shè)空白對照孔，除此孔外，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl，振蕩混勻后，置43℃(或37℃)溫育1h。

　　2.洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20s，甩干。如此重復(fù)洗滌4次，在吸水紙上拍干。

　　3.顯色：每孔加顯色劑A、顯色劑B各50μl，振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min。

　　4.終止：每孔加終止液50μl，振蕩混勻。

　　5.酶標儀檢測：選用450nm波長，用空白孔調(diào)零之后測各孔OD值。

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