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古朵資訊:免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類(lèi),前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本*常用、*基本的方法,對(duì)于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;還能長(zhǎng)期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中的組織標(biāo)本制作方法。
免疫組化常用的染色方法有哪些?
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。
石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)?有哪些方法?
石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定,使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時(shí),需要行抗原修復(fù)或暴露,即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法,高壓加熱法,酶消化法,水煮加熱法等,常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。
石蠟切片在染色過(guò)程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象:
?、倏酒瑫r(shí)間不夠,或溫度不夠,可以延長(zhǎng)烤片時(shí)間和提高烤片溫度;
②用含有多聚賴(lài)氨酸的玻片,可以購(gòu)買(mǎi)到或這自己做;
③有些組織本身就容易掉片,如骨組織等,操作時(shí)沖PBS不要直接沖到組織上,沖到組織上方,讓它流下沖洗組織;
?、苡酶邷匦迯?fù)時(shí),溫度驟冷也可能引起。
它的背景有哪些?
?、倏紤]一抗?jié)舛雀?
?、谌缓笳{(diào)整DAB孵育時(shí)間;
③也要考慮血清封閉時(shí)間是否過(guò)短;
?、苓m當(dāng)增加抗體孵育后的浸洗次數(shù)和延長(zhǎng)浸洗時(shí)間等。
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