古朵新聞 細胞轉染實驗的基本原理及步驟

　　陽離子脂質體介導的轉染

　　原理：陽離子脂質體介導的轉染是目前常用的轉染方式之一。陽離子脂質的基本結構由帶正電荷的頭基和一個或兩個烴鏈組成，帶正電荷的頭基與帶負電荷的核酸通過靜電作用形成復合物，經(jīng)細胞的內吞作用進入細胞。

　　實驗步驟：將DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸和轉染試劑分別在不同的管中稀釋→將兩者混合形成混合物→將形成的混合物加入細胞中，脂質體的正電荷有助于幫助復合物粘附到細胞膜上→復合物經(jīng)細胞內吞作用進入細胞→檢測基因表達或沉默情況。

　　磷酸鈣共沉淀

　　原理：將DNA與氯化鈣在磷酸緩沖鹽水中混合形成磷酸鈣-DNA沉淀物，然后將其分散在培養(yǎng)的細胞上，磷酸鈣促進共沉淀物中的縮合DNA與細胞表面的結合，DNA通過內吞作用進入細胞。

　　實驗步驟：將氯化鈣和DNA混合，以可控的方式加入磷酸緩沖液?！谑覝叵路跤?，以形成極細，可溶的共沉淀微粒→將磷酸鈣-DNA沉淀物加入細胞中，后者能黏附到細胞膜表面→共沉淀物經(jīng)細胞內吞作用進入細胞→檢測基因表達或沉默情況。

　　病毒轉染

　　原理：對于用脂質體不能實現(xiàn)轉染的細胞，可以采用病毒轉染。腺病毒，逆轉錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動物細胞體內外的基因轉染。

　　實驗步驟：通過基因克隆方法獲得重組病毒表達載體→轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組病毒顆?！兓⒌味ú《疽骸D導目的細胞(含病毒特異性的受體)→從培養(yǎng)基中移除病毒→檢測基因表達或沉默情況。

　　電轉

　　原理：利用電脈沖在細胞膜上形成暫時的孔使核酸物質能穿過孔進入細胞。

　　實驗步驟：利用電轉緩沖液重懸細胞→對含有核酸，緩沖液，細胞的混合物給予合適的電脈沖→電脈沖在細胞膜上形成電勢差，誘導產(chǎn)生暫時的孔使核酸進入細胞→將細胞返回到生長培養(yǎng)基中，使其慢慢恢復→檢測基因表達或沉默情況。

　　siRNA轉染

　　RNA干擾(RNAi)現(xiàn)象是由與靶基因序列同源的雙鏈 RNA 引發(fā)的，廣泛存在于生物體內的序列特異性基因轉錄后的沉默過程。胞質中的核酸內切酶 Dicer 將 dsRNA 裂解成由 21-25 個核苷酸組成的 siRNA，隨后 siRNA 與體內蛋白結合形成 RNA 誘導的沉默復合物RISC，RISC與外源性基因表達的mRNA的同源區(qū)進行特異性結合，在結合部位切割 mRNA，被切割后的斷裂mRNA隨即降解，從而阻斷相應基因表達的轉錄后基因沉默機制。

　　用RNAi特異性地抑制如艾滋病病毒基因、肝炎病毒基因、癌基因等相關基因的過度表達，使這類基因保持在靜默或休眠狀態(tài)，這種技術已經(jīng)成為研究基因功能的重要工具，并將在病毒病、遺傳性疾病和腫瘤病的治療方面發(fā)揮重要作用。

　　細胞轉染實驗的基本原理及步驟 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。