古朵帶您全面解析細(xì)胞凋亡

　　細(xì)胞凋亡是在生理或病理條件下，機(jī)體為更好地適應(yīng)生存環(huán)境，由基因控制的細(xì)胞自主有序的死亡。在凋亡的發(fā)生過程中，Bcl-2家族蛋白起著門控開關(guān)的關(guān)鍵性作用?？沟蛲龀蓡T蛋白和促凋亡成員蛋白在細(xì)胞死亡信號檢查點之間的平衡，決定了細(xì)胞的生存或凋亡。按照起始Caspase的不同，哺乳細(xì)胞的凋亡主要有3種途徑：一種稱為外在途徑(extrinsic pathway)，由細(xì)胞表面的死亡受體如Fas和腫瘤壞死因 子受體家族(tumour necrosis factor receptor，TNF-R)引發(fā); 另一種稱為內(nèi)在途徑(intrinsic pathway)或線粒體途徑(mitochondrial pathway)，由許多應(yīng)激條件、化學(xué)試劑和藥物所起始; 第三種途徑是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所導(dǎo)致的Caspase-12的活化，從而引發(fā)凋亡。凋亡現(xiàn)象普遍存在于各種生物體內(nèi)，在胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)、機(jī)體免疫等過程中起到了至關(guān)重要的作用。凋亡異常將會導(dǎo)致癌變或者慢性退行性疾病，所以細(xì)胞凋亡一直是備受關(guān)注的研究熱點。同時了解細(xì)胞死亡和存活機(jī)制也是毒理分析和藥物研發(fā)應(yīng)用中一個非常關(guān)鍵的內(nèi)容。

　　細(xì)胞凋亡(apoptosis)指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。

　　細(xì)胞凋亡與壞死的區(qū)別

　　雖然凋亡與壞死的最終結(jié)果極為相似，但它們的過程與表現(xiàn)卻有很大差別。

　　壞死(necrosis)：壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無序變化的死亡過程。表現(xiàn)為細(xì)胞 脹大，胞膜破裂，細(xì)胞內(nèi)容物外溢，核變化較慢，DNA降解不充分，引起局部嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。

　　凋亡是細(xì)胞對環(huán)境的生理性病理性刺激信號，環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的應(yīng)答有序變化的死亡過程。其細(xì)胞及組織的變化與壞死有明顯的不同。

　　過程

　　1、凋亡起始

　　2、凋亡小體形成

　　3、凋亡小體逐漸被鄰近的細(xì)胞或體內(nèi)吞噬細(xì)胞所吞噬，凋亡細(xì)胞的殘余物質(zhì)被消化后重新利用。

　　形態(tài)學(xué)檢測

　　細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測 根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。

　　1.光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

　　1. 未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。

　　貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。

　　2. 染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割

　　成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

　　2.熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

　　一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。

　　常用的DNA特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三種染料與　DNA的結(jié)合是非嵌入式的，主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。

　　Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。

　　DAPI為半通透性，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。

　　結(jié)果評判：細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased)，部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。

　　3.透射電子顯微鏡觀察

　　結(jié)果評判：凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。

　　細(xì)胞凋亡上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。