影響酪胺的多重?zé)晒?IHC 實驗成功的因素有很多。

一抗?jié)舛龋?/span> 多重小圖中每種一抗的最佳稀釋度必須憑經(jīng)驗確定，并且通?？赡芘c制造商建議的稀釋度存在很大不同，因為酪胺沉淀會引起熒光信號擴增。我們強烈建議使用中等強度的熒光團對每種組分進行滴定，來優(yōu)化多重檢測板的個別組分。

順序優(yōu)化： 優(yōu)化對組織切片應(yīng)用多重小圖中的抗體順序，以確保多輪加熱不會損壞靶標(biāo)特異性表位，這點非常關(guān)鍵。我們建議使用中等強度的熒光團來檢測多重檢測板每個窄縫中的所有優(yōu)化一抗，以確保熒光信號不受檢測板內(nèi)相對位置的影響。

抗體-熒光團配對： 通常，使用最亮的熒光團檢測表達低的靶標(biāo)來配對抗體，這是一種很好的做法。我們建議檢測由優(yōu)化的一抗組成的基質(zhì)和每種可用的熒光團，以獲得檢測板上每種靶標(biāo)的最佳信號強度和信噪比。