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上海古朵生物科技有限公司

如何選擇二抗

時(shí)間:2022-4-13閱讀:246
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什么是二抗?

二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實(shí)驗(yàn)中,二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測(cè)目標(biāo)蛋白。很多二抗都帶有標(biāo)記物,例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過(guò)氧化物酶(HRP),從而使二抗的信號(hào)可以被檢測(cè)到。

實(shí)驗(yàn)中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗,但是二抗有很多優(yōu)點(diǎn)。無(wú)論是使用哪種一抗進(jìn)行檢測(cè),使用二抗可便于更換不同的標(biāo)記物。例如,同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡,也可以與另一種Alexa Fluor 488熒光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)。

另外,二抗結(jié)合在抗原位置的標(biāo)記染料比直標(biāo)一抗要多,從而增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)。使用二抗可以避免對(duì)一抗進(jìn)行復(fù)雜且昂貴的化學(xué)標(biāo)記(偶聯(lián)),而且偶聯(lián)反應(yīng)(具有氨基酸特異性)可能干擾一抗對(duì)抗原的識(shí)別。

選擇最合適的二抗

要選擇出一種適用于您的應(yīng)用和研究的最佳二抗,建議考慮以下因素:

  • 種屬來(lái)源和種屬反應(yīng)性

  • 特異性反應(yīng)

  • 純化方法

  • 交叉吸附

  • 多重檢測(cè)能力

  • 抗體類型和亞型

  • 完整抗體還是抗體片段

  • 標(biāo)記物


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