Q：zui近細(xì)胞狀態(tài)不好，細(xì)胞中有黑色小顆粒；但培養(yǎng)基清亮的，持續(xù)觀察一周沒有看到非常明顯的污染物，細(xì)胞也沒有死亡。那么是什么導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)每況愈下呢？

A：很不幸，你可能是攤上支原體了......

支原體是啥？

支原體（mycoplasma）是目前發(fā)現(xiàn)的zui小的zui簡單的原核生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長繁殖，由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。

細(xì)胞為啥容易被支原體污染？

1.  支原體結(jié)構(gòu)簡單，多數(shù)呈球形，沒有細(xì)胞壁，只有三層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞膜，故具有較大的可變性，直徑 0.13-0.18um，可通過細(xì)菌濾器。

2.  污染初期，顯微鏡高背景下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞黑色顆粒，但細(xì)胞外形無明顯變化，不引起細(xì)胞迅速改變，所以不容易被發(fā)現(xiàn)。

3.  支原體非常頑強(qiáng)，通常用于細(xì)胞培養(yǎng)的絕大多數(shù)抗生素都對其無效。例如青霉素主要作用于細(xì)菌細(xì)胞壁，但支原體沒有細(xì)胞壁因此就不受影響。

有研究表明，世界范圍內(nèi)正在使用的細(xì)胞體系中支原體污染發(fā)生率達(dá) 30%-60%。

支原體污染對細(xì)胞到底有多大影響？

雖然支原體可以與細(xì)胞長期共存，且隨著細(xì)胞換液而緩解，但細(xì)胞遭受支原體污染后會抑制細(xì)胞生長，改變細(xì)胞的 DNA/RNA 及蛋白表達(dá)，影響細(xì)胞信號傳遞，并在后期引起細(xì)胞變形，直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，給生物制品的生產(chǎn)及科研帶來不利的影響。

懷疑細(xì)胞有支原體污染，怎樣去檢測是否有支原體污染？

1.  培養(yǎng)法：支原體在固體培養(yǎng)基上形成特征的「油煎蛋」菌落，但時間周期長。

2. PCR 檢測法：通過對支原體特異性片段的擴(kuò)增及電泳分析快速靈敏地檢出支原體。

3. DNA 熒光染色法：該方法操作較為簡便，但輕度污染不易檢出，且 DNA 熒光染色靈敏度不高

4.  間接免疫熒光法和免疫印跡：簡便、快速、特異性強(qiáng)，但費(fèi)用較高。

5.  電鏡觀察：電子顯微鏡或者免疫電鏡下對樣本進(jìn)行觀察，此法較準(zhǔn)確，但受條件限制，時間長，敏感性不高。

在以上檢測方法中，較常用 PCR 加測支原體為zui常用方法，靈敏性高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)迅速。

怎樣避開支原體？如何擺脫支原體？

1.  控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作；細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。

2.  定期檢測：支原體污染不容易被發(fā)現(xiàn)，因此對培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測非常重要。一般來說每 1 至 3 個月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測。

3.  當(dāng)細(xì)胞被支原體污染后若由于材料的特殊性必須保留可以采用一定的抗生素進(jìn)行處理，對支原體zui有抑制活性抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等。