細(xì)胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒技術(shù)資料

　　產(chǎn)品說明書(中文版)

　　主要用途

　　細(xì)胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù)，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合，經(jīng)過氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)細(xì)胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物和人體細(xì)胞ATP酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

　　三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無機(jī)磷的反應(yīng)，這一反應(yīng)放出大量能量，用于運(yùn)送離子進(jìn)出細(xì)胞，同時供給生物體進(jìn)行需能生命過程。它存在于生物細(xì)胞的多個部位，比如細(xì)胞質(zhì)膜上和葉綠體類囊體膜上等，對整個生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃質(zhì)子泵(gastric proton pump)等。

　　產(chǎn)品內(nèi)容

　　堿性液(Reagent A)毫升

　　反應(yīng)液(Reagent B)毫升

　　激活液(Reagent C)毫升

　　置換液(Reagent D)毫升

　　清理液(Reagent E)毫升

　　顯色液(Reagent F)毫升

　　產(chǎn)品說明書 1份

　　保存方式

　　保存反應(yīng)液(Reagent B)在-20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，避免光照;其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

　　用戶自備

　　蘇木素復(fù)染試劑盒：用于常規(guī)染色后復(fù)染

　　培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

　　光學(xué)顯微鏡：用于染色后觀察分析

　　實驗步驟

　　實驗開始前，將試劑盒里的反應(yīng)液(Reagent B)從-20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作：

　　操作一、25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

　　樣本激活處理

　　小心抽去25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液

　　小心加入xx毫升堿性液(Reagent A)鋪滿整個樣品表面

　　小心抽去堿性液(Reagent A)

　　小心加入x毫升反應(yīng)液(Reagent B)，鋪滿整個樣品表面

　　放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘

　　小心抽去反應(yīng)液(Reagent B)

　　小心加入xx毫升激活液(Reagent C)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去 激活液(Reagent C)

　　重復(fù)實驗步驟7至9二次

　　二、樣本染色處理

　　小心加入xx毫升置換液(Reagent D)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去置換液(Reagent D)

　　小心加入xx毫升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　小心加入xx毫升顯色液(Reagent F)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育30至60秒;或直至可見棕黑色

　　小心抽去顯色液(Reagent F)

　　小心加入xx毫升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　(選擇步驟)樣本復(fù)染處理

　　樣本復(fù)染處理(蘇木素)

　　即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復(fù)染，則細(xì)胞核為藍(lán)色)

　　操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

　　樣本激活處理

　　小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

　　小心加入xx微升堿性液(Reagent A)，鋪滿整個樣品表面

　　小心抽去堿性液(Reagent A)

　　小心加入xx微升反應(yīng)液(Reagent B)，鋪滿整個樣品表面

　　放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘

　　小心抽去反應(yīng)液(Reagent B)

　　小心加入xx微升激活液(Reagent C)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去激活液(Reagent C)

　　重復(fù)實驗步驟7至9二次

　　二、樣本染色處理

　　小心加入xx微升置換液(Reagent D)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去置換液(Reagent D)

　　小心加入xx微升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　小心加入xx微升顯色液(Reagent F)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育30至60秒;或直至可見棕黑色

　　小心抽去顯色液(Reagent F)

　　小心加入xx微升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　(選擇步驟)樣本復(fù)染處理

　　樣本復(fù)染處理(蘇木素)

　　即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復(fù)染，則細(xì)胞核為藍(lán)色)

　　注意事項

　　本產(chǎn)品為50次(2個24孔板)或10次(10個25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶)操作

　　操作時，須帶手套

　　每次更換試劑溶液時，須抽干殘留液體

　　整個操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行

　　細(xì)胞染色注意不要過度

　　避免使用有機(jī)溶劑(乙醇、二甲苯等)脫水、澄清處理

　　細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察

　　本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整試劑溶液：

　　操作容器建議試劑溶液規(guī)格

　　載玻片100微升

　　載玻片培養(yǎng)皿1毫升

　　35mm培養(yǎng)皿1毫升

　　96孔培養(yǎng)板100微升

　　48孔培養(yǎng)板200微升

　　24孔培養(yǎng)板500微升

　　12孔培養(yǎng)板1毫升

　　6孔培養(yǎng)板2毫升

　　25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶3毫升

　　ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒