ELISA試劑盒不同類型的樣本的處理方法
 

　　通常我們可用于ELISA試劑盒檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的*步，下面簡(jiǎn)單介紹一下。

　　1、 血清

　　血清是zui常用于ELISA試劑盒檢測(cè)的一類樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。

　　用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA試劑盒檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。

　　2、 血漿

　　用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

　　常用的抗凝劑為EDTA等，檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說(shuō)明書，檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。

　　3、 細(xì)胞培養(yǎng)上清

　　取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　4、 細(xì)胞裂解液

　　1) 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省略。

　　2) 收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。

　　3) 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。

　　4) 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。

　　在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進(jìn)行45加樣。在定性測(cè)定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時(shí)應(yīng)該使用相同口徑的滴管，保持準(zhǔn)確的加樣姿勢(shì)，使每滴液體的體積基本相同。在定量測(cè)定中則加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時(shí)應(yīng)將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。

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