大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中誤差的解決辦法及實(shí)驗(yàn)條件的選擇
 

　　大鼠ELISA試劑盒是用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。ELISA試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

　　大鼠ELISA試劑盒如果您在實(shí)驗(yàn)過程中犯了以下幾個(gè)小錯(cuò)誤的話也會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)誤差的!

　　1.做實(shí)驗(yàn)時(shí)少說話，防止唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中。

　　2.加入一抗二抗需要放入37°。

　　3.如果同時(shí)做多個(gè)板子，多個(gè)板子別羅一起;盡量少用排槍。

　　4.加樣時(shí)，由低濃度向高濃度加，這樣減少跳孔的幾率。

　　5.勤換槍頭。

　　一 移液器的使用，加樣(抗體)等需要準(zhǔn)確定量的試劑時(shí)不使用排槍，經(jīng)驗(yàn)證明排槍很不準(zhǔn)確，極易跳孔，不要圖便宜買低檔的tips 因?yàn)镋LISA不但會(huì)放大被檢測(cè)的目的蛋白，也會(huì)放大非特異結(jié)合的雜質(zhì)蛋白。

　　二 倍比稀釋樣品時(shí)，稀釋倍數(shù)要小于10。

　　三 所有的裝跟大鼠ELISA試劑盒相關(guān)試劑的容器，玻璃制品的要干烤過或者使用一次性的樹脂容器。

　　在大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

　　(1) 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙x、聚苯乙x、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙x凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

　　(2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，大鼠ELISA試劑盒時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

　　(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

　　(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。大鼠ELISA試劑盒底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

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