ELISA實驗的五種原理及常見問題解析

　　ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。

　　ELISA試劑盒實驗常用的非離子型去污劑。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，ELISA試 劑盒因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。

　　1.雙抗夾心法：適用于大分子物質(zhì)的檢測。將已知的可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體表面，利用抗原抗體異性結(jié)合進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法,具有快速、靈敏、簡便等。

　　2.競爭法：競爭法適用于較少表位的小分子物質(zhì)。將抗體包被于微孔板中，加入無關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點，加入標準品和生物s標記的抗原物質(zhì)進行競爭結(jié)合。

　　3.直接法：主要用于抗原的檢測，將抗原直接固定在固相載體上，洗滌后加入酶標異性抗體，洗滌后加入底物顯色，該方法對抗體的異性要求較高。

　　4.間接法：主要用于抗體的檢測。將異性抗原包被在固相載體表面，與標本中相應(yīng)異性抗體結(jié)合，洗滌后加入酶標的抗體，洗滌后加入底物顯色。該方法對抗原的異性要求較高。

　　5.捕獲法：捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型的檢測。先將針對 IgM的第二抗體連接與固相載體，用以結(jié)合樣品中的所有 IgM，洗滌除去 IgG等無關(guān)的物質(zhì)，然后加入異性抗原與待檢 IgM結(jié)合，再加入抗原異的酶標抗體，后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標抗體復(fù)合物，加酶底物顯色即可對樣品中待檢 IgM是否存在及其含量進行測定。

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