細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒(PI)實(shí)驗(yàn)資料

　　細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒是利用細(xì)胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料結(jié)合的特性，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的熒光強(qiáng)度也不一樣來(lái)檢測(cè)細(xì)胞周期。 細(xì)胞周期(cell cycle)是指細(xì)胞從前一次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動(dòng)過(guò)程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。G1期：細(xì)胞開(kāi)始RNA和蛋白質(zhì)的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S期：DNA開(kāi)始合成，這時(shí)細(xì)胞核內(nèi)DNA的含量介于G1期和G2期之間。當(dāng)DNA復(fù)制結(jié)束成為4倍體時(shí)，細(xì)胞進(jìn)入G2期。G2期的細(xì)胞繼續(xù)合成RNA及蛋白質(zhì)，直到進(jìn)入M期。因此，單純從DNA含量無(wú)法區(qū)分G2期和M期。一旦有絲分裂發(fā)生，細(xì)胞分裂成兩個(gè)細(xì)胞，這兩個(gè)細(xì)胞或者進(jìn)入下一個(gè)細(xì)胞周期，或者進(jìn)入靜止期(G0期)，而G0期從DNA含量上同樣無(wú)法與G1期區(qū)分。因此，整個(gè)復(fù)制周期可以描述為G0/G1、S、G2/M期。通過(guò)核酸染料PI標(biāo)記DNA,并由流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，可以得到細(xì)胞各個(gè)時(shí)期的分布狀態(tài)，計(jì)算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S期細(xì)胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標(biāo)。 PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，就可以得到細(xì)胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài)，從而計(jì)算出各個(gè)期的百分含量。PI染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。 貝博® BBcellProbe® 可以提供各種細(xì)胞檢測(cè)試劑盒。包括細(xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動(dòng)性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品。 貝博® BBcellProbe® 可以為您提供各種顏色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。 貝博® BBcellProbe® 可以提供動(dòng)物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標(biāo)檢測(cè)的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。

　　保存溫度：-20℃避光

　　注意事項(xiàng)：

　　1.染液短期2周內(nèi)可以2-8℃保存。染料長(zhǎng)期不用可以-20℃保存。避免反復(fù)凍融。

　　2.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!

　　有效期：1年

　　檢測(cè)方法：

　　流式細(xì)胞儀

　　適用樣本：

　　1.懸浮細(xì)胞 2.貼壁細(xì)胞

　　產(chǎn)品特點(diǎn)：

　　產(chǎn)品應(yīng)用

　　流式細(xì)胞儀

　　儀器準(zhǔn)備

　　1.流式細(xì)胞儀

　　2.離心機(jī)

　　3.移液器

　　4.冰箱

　　5.冰盒

　　試劑準(zhǔn)備：

　　1.PBS 緩沖液(pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X))

　　2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)

　　耗材準(zhǔn)備：

　　1.離心管

　　2.吸頭

　　3.一次性手套

　　使用注意事項(xiàng)：

　　1.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

　　2.最好使用含EDTA的細(xì)胞消化液。

　　3.洗滌細(xì)胞離心轉(zhuǎn)速不可超過(guò)800×g。

　　4.乙醇固定時(shí)離心大概采用2000×g力5分鐘，離心力太小可能部分細(xì)胞難以沉淀。? 5.固定時(shí)在振蕩器上輕輕振蕩細(xì)胞，并緩慢滴加75%乙醇，直接加入會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞團(tuán)聚的現(xiàn)象，很難重懸成單細(xì)胞?；蛘呦扔美銹BS懸浮細(xì)胞，充分懸浮，使細(xì)胞充分分散成單細(xì)胞。之后緩慢加入無(wú)水乙醇，終濃度為70-90%乙醇。乙醇固定之后須無(wú)細(xì)胞沉淀。

　　使用方法：

　　1. 收集樣本細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量在5-10X106個(gè)。

　　2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。

　　3. 在15ml離心管中，用500 μl PBS重懸細(xì)胞。

　　4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定過(guò)夜或-20℃固定1小時(shí)。

　　5. 取5X106細(xì)胞，在15ml錐形離心管中1000×g離心10分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。

　　6. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。

　　7. 用500 μl冷PBS重懸細(xì)胞。

　　8. 加入Rnase A溶液20 μl， 37℃水浴30分鐘。

　　9. 用400目細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾。

　　10. 在1000×g離心10分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。

　　11. 加入400 μl PI染液重懸細(xì)胞，輕輕混勻后4℃避光孵育30分鐘-1小時(shí)。

　　12. 流式檢測(cè)結(jié)果。激發(fā)波長(zhǎng)為488nm。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。

　　常見(jiàn)問(wèn)題分析：

　　1.染色后找不到細(xì)胞?

　　固定細(xì)胞可能難以離心沉淀;固定細(xì)胞可能成團(tuán);固定細(xì)胞膜容易損傷成碎片。操作過(guò)程中注意以上幾點(diǎn)。

　　2.可以不固定細(xì)胞嗎?

　　本試劑盒可以用于非固定細(xì)胞的周期檢測(cè)。

　　細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。