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問題大全:ELISA試劑盒檢測不成功的原因
elisa試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),它是一種常用的固相酶免疫測定辦法,由于ELISA辦法靈敏,特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因 素較多,并且其操作中有必定的技能要求,在臨床查驗(yàn)中除正常反響外,有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤效果!
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清選用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?;蛟S是溶血血清中含有過 氧化酶物質(zhì),在洗滌過程中往往難以洗脫,它可使 H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),然后催化底物四甲基聯(lián)ben胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色, 產(chǎn)生假陽性.標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同 溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而攪擾測定效果。
標(biāo)本保存不妥。在冰箱中保存過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、形成 假陽性;為打敗上述攪擾,ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮搜集;如不能當(dāng)即測定,5 d 內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白 質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不行激烈振動(dòng)。
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