古朵簡述：抗體滴定的方法與操作步驟

　　簡介:

　　抗體滴定(antibody titration)就是確定合適的抗體用量和抗體濃度，以實(shí)現(xiàn)陽性信號(hào)盡可能強(qiáng)，而陰性信號(hào)盡可能低即得到合適的S/N(信噪比值)。一般抗體供應(yīng)商都會(huì)推薦抗體使用量，如Test包裝抗體。為了達(dá)到很棒的實(shí)驗(yàn)效果及節(jié)省抗體，我們則需要自己做滴定，尤其在多指標(biāo)流式檢測實(shí)驗(yàn)中，抗體滴定就更加重要了。

　　具體的抗體滴定步驟如下:

　　以APC-CD49b (BioLegend Cat#108909) 抗體為例，濃度為0.2mg/ml,推薦抗體使用濃度為 0.25 pg/100ul。起始滴定濃度一般為推薦濃度的兩倍(即起始濃度為0.5ug/100u)，做8次2倍稀釋。假設(shè)用100ul體積，在首孔/管的97.5ul稀釋液里加入2.5u抗體，然后從首孔/管取出50u加入第二/管的50u稀釋液中，從第二孔/管中取出50u加入至第三孔/管的50ul稀釋液，依次倍比稀釋，最后，向每個(gè)孔中加入50ul細(xì)胞，注意整個(gè)操作，抗體要充分混勻。

　　抗體滴定并不是以抗體量/細(xì)胞數(shù)來表示的，滴定的是抗體濃度(如ug/ml)，其與細(xì)胞量在標(biāo)記10萬和1000萬個(gè)細(xì)胞范圍內(nèi)相關(guān)性不大。如果您準(zhǔn)備用于標(biāo)記1億個(gè)細(xì)胞，千萬不要將抗體用量也增加100倍。通常只需增加2 -5倍即可，有時(shí)甚至不用增加用量。如果您經(jīng)常標(biāo)記1億個(gè)細(xì)胞(如分選細(xì)胞時(shí)》，做2 -3個(gè)點(diǎn)的快速滴定是很有用的。同樣的道理，如果您只標(biāo)記5萬個(gè)細(xì)胞，那么也千萬不要減少抗體用量。記住，與抗體用量相關(guān)的指標(biāo)是濃度(抗體量/染色體積)。這意味著，如果您是100ul的體積下進(jìn)行滴定抗體，而染色時(shí)使用1ml的體積，那么你就需要用10倍的抗體量。同樣的道理，如果您在200ul體積下進(jìn)行滴定，而染色時(shí)使用50ul體積，那么您就需要用1/4的抗體量。

　　染色之后，一般確定SI(染色指數(shù))或S/N(信噪比)高的濃度，但有時(shí)也需要考慮一下抗體用量

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