古朵解析——Elisa樣本測值低的原因

　　ELISA 實(shí)驗中，實(shí)驗者經(jīng)常會遇到樣本測值低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液等。假設(shè)客戶的操作正確，標(biāo)準(zhǔn)曲線良好， 這種情況樣本測值低可從兩方面進(jìn)行分析：一是樣本本身含量可被檢測，但由 于實(shí)驗操作等原因?qū)е聵颖緶y值不在試劑盒檢測范圍內(nèi);二是分析物在樣品中 本身濃度偏低。下面古朵生物將從這兩個方面來進(jìn)行分析導(dǎo)致樣本測值低的因素以及對 應(yīng)的解決方案。

　　1.樣本本身含量可以被檢測，有哪些原因?qū)е聹y值低呢?

　　1)試劑盒的保存

　　試劑盒要按照規(guī)定的方法保存，實(shí)驗者在購買試劑盒時請務(wù)必留心試劑盒 不同組分的保存方法。如優(yōu)爾生的試劑盒建議檢測液 A、檢測液 B、標(biāo)準(zhǔn)品以及 酶標(biāo)條等儲存在-20 度，而其它標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液等儲存在 4 度。

　　2)樣本上樣前的準(zhǔn)備

　　這個過程包括樣本的制備、保存以及是否有經(jīng)歷過反復(fù)凍融。樣本的制備 要根據(jù)樣本類型采用不同的方法，血清、血漿與細(xì)胞裂解液的制備方法均不同。 保存，包括保存溫度以及保存時間。一般推薦樣本制備后進(jìn)行分裝后儲存在-20 度或-80 度，儲存時間不宜過久，因為長時間的儲存有可能導(dǎo)致目標(biāo)蛋白的降解， 致使檢測結(jié)果不理想。zui后注意不要反復(fù)凍融，蛋白樣本反復(fù)凍融會導(dǎo)致降解發(fā)生。

　　3)稀釋方案

　　樣本的稀釋對于實(shí)驗的成功至關(guān)重要，稀釋過度以及稀釋不足均有可能導(dǎo) 致樣本的測值低。

　　稀釋過度：一般情況下客戶都會根據(jù)文獻(xiàn)測值，以及檢測范圍估計一個稀 釋倍數(shù)，優(yōu)爾生的試劑盒在出廠之前也會做大量檢測，對于常規(guī)樣本如血清血 漿，我們也會根據(jù)實(shí)驗室樣本測值情況推薦一個稀釋倍數(shù)。但實(shí)驗者如果直接 按照估計或推測的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋檢測后，發(fā)現(xiàn)樣本 OD 非常低。這是由于文 獻(xiàn)作者用的樣本，優(yōu)爾生實(shí)驗用的樣本與實(shí)驗者的樣本會存在一定的差異，這 些測值有一定的參考意義，但如果照搬，可能會導(dǎo)致實(shí)驗失敗。所以建議實(shí)驗 者在正式試驗前是先做預(yù)實(shí)驗確定樣本的有效性以及稀釋倍數(shù)。預(yù)實(shí)驗， 可參考文獻(xiàn)，將樣本進(jìn)行梯度稀釋，zui后選取樣本 OD 落在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間位置的 點(diǎn)的稀釋倍數(shù)。

　　稀釋倍數(shù)不夠：鉤狀效應(yīng)，Elisa 實(shí)驗中發(fā)生鉤狀效應(yīng)主要是當(dāng)抗原與抗體 比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，抗原過量稱為后帶效應(yīng)。當(dāng)樣本中目標(biāo)物含 量很高，而沒有進(jìn)行正確的稀釋，就有可能會導(dǎo)致假陰性反應(yīng)。解決方案依舊 同稀釋過度的解決方案一樣，在正式實(shí)驗之前做預(yù)實(shí)驗。

　　2.分析物在樣品中本身濃度偏低

　　很多時候，客戶操作沒有問題，標(biāo)準(zhǔn)曲線良好，但檢測多次樣本依然不在 檢測范圍。像細(xì)胞因子，如 IL-6 需在炎癥刺激情況才會大量產(chǎn)生，一般非炎癥 樣本測值會非常低。針對這種測值比較低的情況，一般建議根據(jù)文獻(xiàn)選取適合 的樣本類型，同時可以選用高靈敏度的試劑盒，優(yōu)爾生針對某些容易出現(xiàn)測值 低的指標(biāo)都有研發(fā)出高靈敏度的試劑盒，如 IL-6 等。

　　Elisa上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。