DEAE-瓊脂糖凝膠 CL-6B使用說明書

　　中文名：DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B

　　英文名：DEAE Sepharose CL-6B

　　規(guī)格：100ml、500ml

　　粒徑： 45-165μm

　　配基基團(tuán)：carboxymethyl(羧甲基)

　　總離子交換量：0.09-0.13mmol/g凝膠

　　工作PH值：6-10

　　操作溫度：4-40℃

　　性狀(以下信息僅供參考)：含20%乙醇，底部為乳白色膠體。

　　保存：2～8℃

　　用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)適用于各種帶陽性電荷生物大分子的濃縮純化等。

　　DEAE-瓊脂糖凝膠 CL-6B

　　DEAE-瓊脂糖凝膠 CL-6B適用范圍

　　本產(chǎn)品具有高化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機(jī)械性能、可在位清洗、多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率高，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，適用于在pH工作范圍內(nèi)可形成負(fù)離子的生物大分子的分離純化，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

　　DEAE-瓊脂糖凝膠 CL-6B使用方法

　　1、裝柱：

　　a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

　　b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。

　　c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。

　　d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

　　e、打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

　　2、平衡：

　　讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液，如Tris 、PBS等。

　　3、上樣：

　　a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。

　　b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

　　c、介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和pH值。鹽濃度小，介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附較牢。用DEAE介質(zhì)時(shí)，推薦的pH值是大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點(diǎn)1個(gè)單位。

　　4、洗脫：

　　DEAE介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小pH值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。

　　5、再生

　　一般用高鹽濃度的緩沖液(含1~2mol/L NaCl)洗或減小pH洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

　　6、在位清洗

　　a、對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

　　b、對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

　　c、對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

　　7、注意：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入;在使用過程中，不能使用強(qiáng)酸，如使用酸洗，應(yīng)使用濃度低于0.1 M的冰醋酸。

　　8、去熱源：用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：

　　a、2倍柱體積的70%乙醇;

　　b、2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5;

　　c、1倍柱體積4M尿素;

　　d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl;

　　e、以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

　　9、消毒用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

　　10、滅菌置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中120℃下30分鐘。

　　DEAE-瓊脂糖凝膠 CL-6B注意事項(xiàng)

　　1、產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20%乙醇)，通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。

　　2、本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸;避免在pH值<4時(shí)長(zhǎng)時(shí)間暴露(一周，20℃)。

　　3、保質(zhì)期：5年。

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