之前分析了艾美捷worthington細胞分離優(yōu)化技術的一般準則，那么接下來一起看看優(yōu)化技術之優(yōu)化策略吧~

艾美捷worthington優(yōu)化技術：優(yōu)化策略

查看Worthington 組織解離指南的參考文獻，了解特定組織和感興趣的細胞類型，然后將此信息應用于組織解離的實際應用。

基本優(yōu)化策略的示例如下：

根據(jù)引用的酶、工作濃度和使用的緩沖液或培養(yǎng)基系統(tǒng)，設置類似于表中列出的接近的可用參考的建議初步解離條件。

如果大多數(shù)最相似的參考程序引用了一種以上的酶，則在添加輔助酶之前優(yōu)化主酶的濃度（相對濃度最高的酶）。例如，如果兩個最相似的參考文獻引用膠原酶 0.1% 和 DNase 0.01%，膠原酶 0.075% 和透明質酸酶 0.025%，則在評估透明質酸酶或脫氧核糖核酸酶的效果之前，憑經驗優(yōu)化膠原酶濃度。

在優(yōu)化主要酶的濃度和孵育條件后，評估任何次要酶。

最初將主要酶的濃度相對于參考程序改變約 50%。上述膠原酶濃度為 0.1% 和 0.075% 的例子表明酶濃度在 0.025% 和 0.15% 之間的評估。濃度增量應均勻分布以覆蓋整個范圍。因此，將指示 0.025%、0.05%、0.075%、0.10%、0.125% 和 0.15% 的增量濃度。為了簡化初始篩選，可以選擇中間范圍，在評估產量和活力結果后，可以決定是否需要進一步研究。在這種情況下，評估的初始膠原酶濃度可以是 0.05%、0.075%、0.10% 和 0.125%。

從過往看，大多數(shù)組織解離和細胞分離方案都引用了以每單位體積重量 (w/v) 表示的酶濃度。然而，最近，一些研究人員開始以活性為基礎使用酶，即每毫升單位 (u/ml)。使用任何一種方法，但要考慮每種方法的優(yōu)缺點：

a) 傳統(tǒng)的每單位體積重量法很可能是由于使用了較粗的、部分純化的酶混合物，并且與可能存在的任何特定或污染活性無關地使用。對于這些粗制品中的一些，批次間的差異可能很大，導致添加的酶活性量的重量差異高達兩倍。

b) 通過活性添加可能導致添加到解離的重量可能存在兩倍的差異；但是，根據(jù)每批的主要活性對使用的效力進行標準化。

這兩種方法都忽略了相對的污染物活動水平。在建立基本方法后，考慮對不同批次的酶進行預取樣以評估這些因素并選擇對特定應用的關鍵參數(shù)影響最小的大量酶。

艾美捷worthington重要提示：為了準確評估特定程序的性能，應對細胞產量和活力進行定量和比較。在優(yōu)化基本解離和分離條件后，還應評估代謝功能或受體結合能力等特定應用參數(shù)。基于這些結果，可以判斷該方法適合使用或重新優(yōu)化以更高地保留天然細胞特征。

Worthington專注于高質量純化酶，蛋白質，核酸和試劑盒。其核心酶產品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶 等。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。