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關(guān)于艾美捷worthington細(xì)胞分離優(yōu)化技術(shù),主要包含一般準(zhǔn)則、優(yōu)化策略和細(xì)胞定量、生存能力測量這四個(gè)方面。那么接下來一起看看一般準(zhǔn)則的詳細(xì)攻略吧~
艾美捷worthington優(yōu)化技術(shù):一般指南
盡管針對特定細(xì)胞類型的細(xì)胞分離程序的優(yōu)化取決于具有各種所需特性的細(xì)胞的充分回收,但可以建立一些指導(dǎo)方針。本指南中有關(guān)細(xì)胞分離和所用酶的信息,結(jié)合邏輯和適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),應(yīng)能開發(fā)出令人滿意的細(xì)胞分離方法。(有關(guān)詳細(xì)討論,請參見 Freshney 1987。)
圖1:細(xì)胞產(chǎn)量和活力之間的復(fù)雜關(guān)系可以通過左側(cè)顯示的簡化圖示來表示。一般來說,在產(chǎn)量和生存力之間存在平衡的優(yōu)化回收區(qū)域;在該范圍的中間附近工作將減少細(xì)胞分離過程結(jié)果的可變性。了解這種關(guān)系以及它如何隨特定細(xì)胞類型和應(yīng)用而變化,可以使優(yōu)化過程更容易。
圖2:出于故障排除的目的,艾美捷worthington列出了各種可能的結(jié)果以及建議的糾正措施。請記住,象限之間沒有明確的界限,而是具有可變重疊區(qū)域的會(huì)聚區(qū)域。
1.低產(chǎn)量/低活力:過度/欠解離,細(xì)胞損傷。改用較少消化的酶和/或降低工作濃度。(例如從yi蛋白酶到膠原酶/從 2 型膠原酶到 1 型)。
2.低產(chǎn)量/高活力:解體下。增加酶濃度和/或孵育時(shí)間并監(jiān)測產(chǎn)量和活力反應(yīng)。如果產(chǎn)量仍然很低,請?jiān)u估更易消化的酶和/或添加輔助酶。
3.高產(chǎn)量/低活力:解離性好,細(xì)胞損傷。酶過度消化和/或工作濃度過高。減少濃度和/或孵育時(shí)間并監(jiān)測產(chǎn)量和活力響應(yīng)。
嘗試通過添加牛血清白蛋白 (BSA) (0.1 - 0.5% w/v) 或大豆yi蛋白酶抑制劑 (0.01 - 0.1% w/v) 來稀釋蛋白水解作用。嘗試使用較少的蛋白水解酶,盡管產(chǎn)量可能會(huì)受到影響并應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測。
4.高產(chǎn)量/高活力:考慮評(píng)估解離參數(shù)的影響,以了解它們的局限性以供將來參考。
Worthington專注于高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,yi蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。
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