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當(dāng)前位置:武漢艾美捷科技有限公司>>公司動態(tài)>>Worthington血漿胺氧化酶 (PAO) 說明書
血漿胺氧化酶 (PAO) 催化反應(yīng):
RCH 2 NH 2 + O 2 + H 2 O → RCHO + NH 3 + H 2 O 2
牛血漿胺氧化酶的分子量為 170 kDa,精胺的最適 pH 值為 6.2,亞精胺的最適 pH 值為 7.2。胺氧化酶分為兩類:血漿胺氧化酶所屬的含吡哆醛和銅的酶,以及含FAD的氨基氧化酶。天然底物包括兒茶酚胺、色胺衍生物和其他生理活性胺。血漿胺氧化酶用于需要氮基轉(zhuǎn)移的研究。該分子由兩條相同的多肽鏈組成。每個分子有兩個磷酸吡哆醛和兩個 Cu +原子。牛血漿胺氧化酶受銅螯合劑、許多羧基試劑如銅酮、羥胺和氰丨化物的抑制。苯甲酸和苯甲醇都是非競爭性抑制劑(KI = 30 和 34mM 分別)。Worthington 采用的測定胺氧化酶的測定法基本上是 Tabor等人,JBC, 208,645,(1954) 的測定法,反應(yīng)溫度降至 25°C。
艾美捷Worthington 血漿胺氧化酶 (PAO)化學(xué)性質(zhì):
穩(wěn)定性/儲存: -20°C 可穩(wěn)定保存 12 個月。儲存在-20°C。
單位定義:在 25°C、pH 7.2 條件下,1 個國際單位每分鐘氧化 1µmole 芐胺。
技術(shù)說明: 1 IU 等于 4,330 Tabor 單位。(TU)
艾美捷Worthington 血漿胺氧化酶 (PAO)測定方案:
方法: Kapeller-Adler (1971) *審查了胺氧化酶的測定。Worthington 采用的方法本質(zhì)上是 Tabor等人的方法。(1954) 反應(yīng)溫度降至 25°C。
反應(yīng)速度由芐胺氧化引起的 250 nm 處吸光度的增加來確定。在指丨定條件下,在 25°C 和 pH 7.2 條件下,一個單位會導(dǎo)致每分鐘氧化 1 微摩爾芐胺。如此定義的一個國際單位相當(dāng)于 4330 個泰伯爾單位(泰伯爾和泰伯爾,1972 年)。
試劑:
67 mM 磷酸鉀緩沖液 pH 7.2
1.0% v/v (0.10 M) 芐胺(如果有顏色,重新蒸餾)在 67 mM 磷酸鉀緩沖液中,pH 7.2(底物)
酶:
在 67 mM 磷酸鉀緩沖液(pH 7.2)中溶解至濃度為 10 mg/ml。
程序:
將分光光度計調(diào)整到 250 nm 和 25°C。將 2.8 ml 緩沖液和 0.1 ml 底物溶液倒入每個比色杯吸管中。
在分光光度計中孵育 3-4 分鐘以達(dá)到溫度平衡并建立空白率(如果有)。加入 0.1 ml 酶溶液并記錄 A 250增加6-8 分鐘。從曲線的線性部分計算 ΔA 250 /分鐘。可能會出現(xiàn) 2-3 分鐘的延遲,之后反應(yīng)應(yīng)與 A 250為 0.75 呈線性關(guān)系。
艾美捷Worthington 血漿胺氧化酶 (PAO)相關(guān)參考文獻(xiàn):
1.Achee, F., Chervenka, C., Smith, R., and Yasunobu, K.: XII. The Association and Dissociation, and Number of Subunits of Beef Plasma Amine Oxidase , Biochemistry 7, 4329, 1968
2.Bachrach, U.: Metabolism and Function of Spermine and Related Polyamines , Annu Rev Microbiol 24, 109, 1970
3.Bachrach, U.: Function of Naturally Occurring Polyamines,, Academic Press, NY, , 1973
4.Bachrach, U., and Reches, B.: Enzymic Assay for Spermidine , Anal Biochem 17, 38, 1966
Worthington核心酶:包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等。
Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。
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