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Worthington磷脂酶A2研究丨磷脂酰膽2-乙酰水解酶

時(shí)間:2022-7-27閱讀:98
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磷脂酶 A2 代表一類熱穩(wěn)定的鈣依賴性酶,可催化 3-n-磷酸甘油酯的 2-?;I水解。這種酶被命名為磷脂酶 A2 以表示其 2-?;禺愋?nbsp;(Uthe 1971)

 

已從胰腺、蛇和蜜蜂毒液中分離出磷脂酶 A2。福斯特等人。(1986),陳等人。(1982), Coulard等人。(1987 年)和 Horigome等人。(1987 年)關(guān)于血小板磷脂酶 A2 的報(bào)告。Verheij等人已經(jīng)報(bào)道了人類胰腺 PLA2 的一級(jí)結(jié)構(gòu)。(1983 年)。

 

磷脂酶參與脂質(zhì)代謝,是生物膜結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的重要探針。道森 1973 年)。

 

艾美捷Worthington 磷脂酶 A2化學(xué)性質(zhì):

組成:

兩種表現(xiàn)出磷脂酶 活性的蛋白質(zhì)(A 2- α、A 2- β)已從Crotalus adamanteus中分離出來(Saito 和 Hanahan 1962,以及 Wells 和 Hanahan 1969)。每種蛋白質(zhì)都由二聚體亞基組成(Wells 1971)。這兩種蛋白質(zhì)具有相似的活性,但在色譜和電泳上是不同的。海因里克森等人。(1977) 報(bào)道了這兩種酶的特別結(jié)構(gòu)特征和磷脂酶 A2-α 的完整氨基酸序列。這兩個(gè)亞基在一個(gè)氨基酸上不同; A 2- α 在殘基 117 處含有g(shù)u氨酰胺,而酸性更強(qiáng) 的 A 2- β 在該殘基處含有g(shù)u氨酸。


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蛋白質(zhì)登錄號(hào):
P00623 

分子量:30,000 (Wells 1969)

消光系數(shù):  消光系數(shù)= 22.7 (Wells 1969)

等電點(diǎn):A-α 和 A-β 分別為 4.55 和 4.40 (Saito 1962)

活化劑:鈣離子 (Dennis 1973)

抑制劑:鋅、鋇和錳離子(Golec等人1992 和 Uthe 1971

特異性:該酶特異性催化 L- α 磷酸甘油酯的β-脂肪酯鍵的水解 (Van Deenen 1963)

 

艾美捷Worthington 磷脂酶 A2 檢測(cè)

Method : 源自滴定測(cè)定程序的磷脂酶 A2 制劑的活性值可能*取決于luan磷脂的來源和類型、其作為底物乳液的制備、反應(yīng)混合物的其他組分以及使用的方法學(xué)/儀器。文獻(xiàn)中報(bào)道的高純度毒液磷脂酶 A2 的值范圍為 200 至 3000 單位/mg。分析系統(tǒng)之間的比較是困難的。已發(fā)現(xiàn)以下測(cè)定在我們的實(shí)驗(yàn)室中是可重復(fù)的。在特定條件下,一個(gè)單元在 pH 8.9 和 25°C 下每分鐘從luan磷脂乳液中釋放 1 個(gè)微摩爾可滴定脂肪酸。

 

試劑

0.1 M 氯化鈣

1.0 M 氯化鈉

luan磷脂乳液:在 250 ml 燒杯中稱取 4.0 克試劑級(jí)大豆luan磷脂,加入 30 ml 1.0 M 氯化鈉、10 ml 0.1 M 氯化鈣和 100 ml 試劑級(jí)水。在 4°C 下攪拌 30 分鐘后,在 Branson 超聲波儀或同等設(shè)備上以最大功率對(duì)混合物進(jìn)行 10 分鐘的超聲波處理。用試劑級(jí)水稀釋至終體積為 200 ml

0.01-0.02 N NaOH - 標(biāo)準(zhǔn)化

 

將酶以 1.0 mg/ml 的濃度溶解在試劑級(jí)水中。在運(yùn)行測(cè)定時(shí)將此儲(chǔ)備溶液保持在冰上。使用前立即在試劑級(jí)水中進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。

 

程序

可以使用自動(dòng)滴定儀或?qū)嶒?yàn)室 pH 計(jì)進(jìn)行滴定。反應(yīng)容器應(yīng)保持在 25°C。

 

空白率測(cè)定:將 15 ml luan磷脂乳液移入 25°C 的反應(yīng)容器中。將 pH 值調(diào)節(jié)至 8.9,并在獲得恒定速率后記錄將 pH 值保持在 8.9 3-5 分鐘所需的滴定劑體積。將空白速率"確定為從曲線的最后線性部分每分鐘添加的滴定劑體積。

 

樣品測(cè)定:在上述乳液中加入適當(dāng)稀釋的酶。記錄將 pH 值保持在 8.9 4-5 分鐘所需的滴定劑量。從曲線的線性部分確定采樣率"為每分鐘添加的滴定劑體積。

 

Worthington核心酶:包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等。

 

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。


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