關(guān)于支原體檢測(cè)：

一般選擇血清學(xué)檢查、核酸檢測(cè)可以檢驗(yàn)支原體，具體如下：1、臨床上對(duì)于支原體的檢測(cè)主要是檢測(cè)疑似感染者的血清學(xué)抗體，因?yàn)楦腥灸撤N微生物以后人體會(huì)產(chǎn)生抗體；2、檢驗(yàn)標(biāo)本里的核酸，如果送檢痰或者血、尿液里有支原體核酸，也可以認(rèn)為有感染情況。支原體是一種介于細(xì)菌、病毒之間的微生物，個(gè)頭比細(xì)菌稍微要小一點(diǎn)，但是比病毒大一些，可以透過(guò)濾菌器，在一般的培養(yǎng)基上培養(yǎng)不出來(lái)，需要特殊的培養(yǎng)基，這使得支原體檢測(cè)存在很多困難。

艾美捷支原體檢測(cè)試劑盒：

中文名稱：支原體檢測(cè)試劑盒

英文名字：Mycoplasma Detection Kit

編號(hào)：13100-01

規(guī)格：50Reactions

保存建議：-20℃可保存15個(gè)月，凍干粉重懸后需置于-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，如果每次進(jìn)行檢測(cè)的樣本較少，請(qǐng)將三種試劑分裝保存

艾美捷支原體檢測(cè)建議的方案：

•試劑制備

•樣品制備

•熱循環(huán)計(jì)劃

•PCR主混合

o每次反應(yīng)的總體積為50μL

在準(zhǔn)備反應(yīng)時(shí)，計(jì)算還應(yīng)包括陽(yáng)性和陰性對(duì)照

向每個(gè)試管中加入48μL主混合物

主混合料的內(nèi)容如下-

注-如果使用Taq以外的聚合酶，則使用隨酶提供的PCR緩沖液和最終MgCl2濃度必須調(diào)整到3.0 mM

o向適當(dāng)?shù)?span style="font-family: Calibri;">PCR反應(yīng)管中加入2μL不含DNase的水作為陰性對(duì)照

o將試劑盒中提供的2μL重組陽(yáng)性對(duì)照DNA添加到適當(dāng)?shù)?span style="font-family: Calibri;">PCR反應(yīng)管中

o將2μL熱處理試樣加入適當(dāng)?shù)?span style="font-family: Calibri;">PCR反應(yīng)管中

o根據(jù)熱循環(huán)程序運(yùn)行

•瓊脂糖凝膠電泳

•凝膠評(píng)價(jià)

o含有支原體感染的樣品將包含約448 bp至約611 bp之間的一條（或多條）帶

o含有所提供的內(nèi)部對(duì)照DNA的樣品將含有明顯的270 bp PCR產(chǎn)物

可與陽(yáng)性樣本中發(fā)現(xiàn)的約448bp至約611bp帶區(qū)分（見(jiàn)樣本數(shù)據(jù)，泳道7）

內(nèi)部控制表明PCR反應(yīng)成功

如果內(nèi)部控制帶在某些樣品中消失，則可能發(fā)生PCR抑制，但該帶是

存在于陰性對(duì)照的PCR反應(yīng)中（添加水代替測(cè)試樣品）

•如果樣品的PCR被抑制，則可以通過(guò)進(jìn)行DNA分析來(lái)輕松去除抑制劑

提取

o如果細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體嚴(yán)重污染，擴(kuò)增約448 bp至約611 bp的產(chǎn)物可能

減少或完-全消除270 bp的內(nèi)部控制產(chǎn)品（見(jiàn)樣本數(shù)據(jù)，泳道6）

o小于100 bp的低強(qiáng)度帶表明存在非特異性自退火引物；這不是

表示肯定的結(jié)果，并且不會(huì)影響測(cè)試的精度