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驅(qū)動蛋白重鏈ATP酶活性檢測方案大放送!

時間:2021/5/12閱讀:341
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驅(qū)動蛋白是1985年從魷魚的軸質(zhì)(axonplasm)中分離的一種發(fā)動機蛋白。能利用ATP水解所釋放的能量驅(qū)動自身及所攜帶的貨物分子沿微管運動的一類馬達蛋白,與細胞內(nèi)物質(zhì)運輸有關(guān)。

Kinesin.png

 

結(jié)構(gòu)及功能:

 

驅(qū)動蛋白是一條長80nm的桿狀結(jié)構(gòu),頭部一端有兩個成球狀的馬達結(jié)構(gòu)域,另一端是重鏈((kinesin heavy chain,KHC)和輕鏈(kinesin light chain,KLC)組成的扇形尾端,中間是重鏈組成的桿狀區(qū)。球狀的頭部具有ATP結(jié)合部位和微管結(jié)合部位。大多數(shù)驅(qū)動蛋白趨向于微管的正端,在大多數(shù)細胞中,這要求將貨物(例如蛋白質(zhì)和膜成分)從細胞中心向外圍運輸。這種運輸方式稱為順行運輸。

Kinesin-1.png

 

由于驅(qū)動蛋白在在細胞諸多物質(zhì)運輸過程中起著至關(guān)重要的作用,對不同狀態(tài)下驅(qū)動蛋白活性檢測也有了需求,驅(qū)動蛋白通過利用ATP水解的能量沿著微管(MT)上面移動而起作用。一旦驅(qū)動蛋白結(jié)合到它預定的MT軌道上,ATPase的作用效果通常會提高幾百到幾千倍。MT激活的驅(qū)動蛋白ATPase是其運動功能的主要參數(shù),是監(jiān)測和研究各種實驗條件下驅(qū)動蛋白活性的有力方法。

 

Cytoskeleton的Kinesin ELIPA 驅(qū)動蛋白ATP酶檢測(酶聯(lián)無機磷酸鹽測定)試劑盒,主要基于在無機磷酸鹽(Pi)的存在時,在苯胺中嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)將2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤核糖核苷(MESG)催化為2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤時在330-360 nm處發(fā)生的吸光度變化來反映驅(qū)動蛋白活性。一分子無機磷酸鹽將在不可逆的反應中生成一分子2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤。用途如下:

1.動力學測量微管激活的驅(qū)動蛋白ATPase的活性

2.驅(qū)動蛋白抑制劑的篩選現(xiàn)

3.驅(qū)動蛋白抑制劑IC50s的測定

 

檢測結(jié)果如下:

Kinesin-2.png

微管激活驅(qū)動蛋白重鏈ATP酶活性檢測結(jié)果:檢測了一些驅(qū)動蛋白ATP酶活性。ATP水解的Vmax范圍從驅(qū)動蛋白HC10,000 nmol ATP / min / mg到染色質(zhì)激酶的470 nmol ATP / min / mg之間。

 

文章來源:艾美捷科技

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